一、碳酸酐酶抑制剂对AQP1水通道和肿瘤转移的影响（论文文献综述）
高硕[1]（2021）在《新型AQP1抑制剂的结构优化及其抗肿瘤活性的研究》文中研究指明背景:水通道蛋白1（Aquaporin 1,AQP1）是位于细胞膜上的疏水性跨膜蛋白,在水的跨细胞运输中起主要作用。越来越多的研究表明,AQP1的过表达与许多类型的癌症相关,如脑瘤、肺癌、肝癌、结直肠癌、乳腺癌等,并证实AQP1在肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭及肿瘤血管生成的过程中发挥重要的调控作用。所以,以AQP1为肿瘤标志物（Biomarker）的抑制剂的研究将为靶向抗肿瘤新药的发现及肿瘤靶向治疗提供新的方向和途径,但截至目前水通道蛋白AQP1的抑制剂在肿瘤治疗中的应用尚未见报道。基于AQP1的结构,导师课题组前期设计合成了一系列结构不同的糖接杂环类化合物,抗肿瘤活性筛选发现DAP-20表现出明显抑制肺癌的活性;Western Blot分析结果表明DAP-20对AQP1有明显的抑制作用;分子模型计算表明DAP-20能够和AQP1对接证明两者之间的相互作用。目的:以DAP-20为先导化合物,合成一系列基于DAP-20的类似物,进一步优化结构,筛选出对肿瘤细胞的增殖、迁移/转移、侵袭及血管生成有强抑制作用,有临床应用前景的抗肿瘤化合物,为深入研究抗肿瘤新药开辟新的道路。方法:合成一系列基于DAP-20结构的类似物,在其1,3,4-恶二唑中的5-位引入大小和性质不同的共轭体系,并在此共轭体系中不同的位置,引入大小不同、电性不同（吸电子或推电子）的基团。通过CCK8法检测上述化合物分别对人乳腺癌细胞MDA-MB-231、前列腺癌细胞PC3、结肠癌细胞HT-29、宫颈癌细胞He La的抗肿瘤活性。结果:通过合成、分离、纯化共得到了120多个化合物,其中新化合物116个,58个为目标化合物。结构经1H、13C-NMR、COSY、NOESY谱、元素分析、HRMS、X-射线单晶衍射数据完成了确认。抗肿瘤活性测试结果显示,1,3,4-恶二唑中5-位引入不同的共轭体系,及不同位置引入大小不同、电性不同基团的化合物表现出不同的抗肿瘤活性。结论:目标分子结构与抗肿瘤活性之间的对应关系印证了我们基于AQP1结构的新型抑制剂研究的设计思想,并为进一步优化结构、提高抗肿瘤活性和抑制AQP1的表达的新探索提供了基础和帮助。
沐玉荣[2]（2021）在《AQP1通过wnt/β-catenin通路促进FLS活化参与大鼠胶原性关节炎发病的机制研究及（Ac）5GP对RAFLS生物学行为的影响》文中研究说明类风湿关节炎（Rheumatoid arthritis,RA）是一种以慢性滑膜炎、软骨骨破坏为特征的自身免疫性疾病,是造成人群致残和丧失劳动力的主要原因之一。RA发病机制尚未阐明,研究表明成纤维样滑膜细胞（fibroblast-like synoviocytes,FLS）活化是RA发病和病情进展的重要原因。水通道蛋白（aquaporins,AQPs）是一组与水通透性相关的膜转运蛋白,水通道蛋白的分子结构和生物功能以水通道蛋白1（AQP1）研究最为清楚。越来越多的证据表明,AQP1可以在滑膜组织等组织中表达,RA滑膜中AQP1的上调与滑膜炎症和关节肿胀有关。然而,尚不清楚AQP1在RA中的确切药理作用及潜在机制。乙酰唑胺（Acetazolamide,AZ）是一种广泛应用的碳酸酐酶抑制剂,已被报道在癫痫、青光眼、高原病和水肿等多种疾病的治疗中发挥作用。此外,AZ能抑制AQP1蛋白的表达,抑制AQP1介导的水渗透性,提示AZ在体内外均可作为AQP1的有效抑制剂。五乙酰栀子苷（（Ac）5GP,栀子苷的乙酰化衍生物）表现出比栀子苷更好的药理功能,例如抗炎,抗糖尿病,抗纤维化,抗氧化,抗凋亡和抗肿瘤活性。FLS是组成滑膜内膜的最丰富的细胞类型。在正常情况下,滑膜有助于关节的平滑运动,而在RA中,FLS具有侵袭性病理表型。与正常FLS相比,RA-FLS被激活并表现出独特的侵袭性和侵袭性表型,包括过度增殖,抗凋亡以及增强的迁移和侵袭。RA-FLS向软骨和骨骼的迁移增加以及随后细胞外基质的入侵是破坏RA关节的重要事件。在本研究中,探讨（Ac）5GP对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的保护作用,为RA的防治提供新的思路和药物靶标。本课题的主要研究内容包括以下2个方面:1.水通道蛋白1通过wnt/β-catenin通路促进FLS活化参与大鼠胶原性关节炎发病的机制研究目的:本研究旨证明AQP1可能通过调节β-catenin信号传导参与RA的发病过程,阐明AQP1抑制剂AZ对大鼠CIA的治疗作用并探讨其潜在机制。方法:采用继发性足肿胀和踝关节病理组织学变化来评价CIA大鼠的严重程度。免疫组织化学（IHC）和蛋白质印迹法（Western blot）检测滑膜组织AQP1和β-catenin的表达。使用AQP1 si RNA敲除培养CIA FLS中的AQP1。使用MTT法、PCNA免疫荧光法和transwell法检测RA FLS的增殖、迁移和侵袭。Western blot实验检测wnt/β-catenin通路中的β-catenin,p-GSK-3β（Ser9）,c-myc,cyclin D1和MMP9的蛋白水平。检测继发性足肿胀、关节炎指数、踝关节病理指标、血清中II型胶原抗体、IL-1β和TNF-α水平,以评估AQP1抑制剂AZ对CIA大鼠的抗关节炎作用。采用Ki67免疫组化和TUNEL实验检测AZ对滑膜细胞的抗增殖、促凋亡作用。Western blot检测凋亡相关蛋白和Wnt/β-catenin通路的蛋白水平。结论:水通道蛋白1通过wnt/β-catenin通路促进FLS活化参与大鼠胶原性关节炎的发病过程。2.五乙酰栀子苷通过抑制Wnt/β-catenin通路抑制类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的迁移,侵袭和炎症目的:本研究旨在观察（Ac）5GP对RA成纤维样滑膜细胞MH7A细胞迁移,侵袭和炎症的影响,并探讨其可能存在的相关机制。方法:MTT法检测细胞活力,划痕和transwell实验检测细胞迁移和侵袭,F-actin检测细胞骨架重组,免疫荧光检测β-catenin的核易位。Elisa试剂盒用于检测IL-1β,IL-6,IL-8,MMP-2和MMP-9等炎症因子水平,western Blot检测迁移,侵袭,炎症因子和其他相关蛋白水平。结论:（Ac）5GP通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制MH7A的迁移、侵袭和炎症反应。
宋达[3]（2019）在《乙酰唑胺通过降低水通道蛋白1抑制小鼠心脏早期心室重构》文中研究指明心室重构（Ventricular remodeling）是各种器质性心脏病向心力衰竭发展的共同通路,心室重构这一病理生理过程一经启动进行性恶化,它贯穿心力衰竭发展的始终。其特征改变是心脏几何结构异常,心肌细胞肥大伴随功能异常、数量减少,心脏间质细胞增加,伴随心脏功能下降。高血压、冠心病、心肌病、瓣膜病、应激反应及化学药品等均会导致心室重构发生。其中高血压,冠心病是最常见原因,心室重构是高血压、冠心病病情恶化进展的重要因素,抑制心室重构是抑制心功能进行性下降,改善患者预后的关键因素。关于心室重构的基础和临床研究很多,但仍没有完全阐明心室重构发生发展的机制,虽然治疗手段很多,但仍没有一种确切治疗手段能够抑制逆转心室重构。可见这一病理生理过程本身极其复杂,理化因素、病理刺激、自身免疫、炎症反应等等因素均可诱发心室重构。如何合理用药抑制心室重构,延缓心衰进展,最大限度改善预后,有着重大临床意义和社会效益。水通道蛋白（Aquaporins,AQPs）自发现至今已有30年,共发现13种AQPs（AQP0AQP12）表达于哺乳动物细胞膜上,它们的作用是负责水分子跨膜转运,在渗透压梯度作用下协调水分子的跨细胞膜转运。研究发现,在人类和鼠心肌组织中,AQPS家族中AQP1表达最多,主要表达于血管内皮细胞和心肌细胞膜上,在生理作用下,介导水的跨膜转运,维持组织细胞间水的平衡。病理状态下,如发生心肌缺血再灌注损伤（myocardial ischemia/reperfusion injury,MI/RI）后,AQP1异常表达将引起心肌细胞水肿,并且会导致微血管通透性增加,发生MI/RI,病变区域心肌组织的血供减少或消失,进而引发心脏氧供不足,心肌能量获取不足,有毒代谢产物释放增加,导致心肌细胞功能异常。在缺血再灌注早期,由于是缺血缺氧代谢异常所致的大量细胞因子、炎症介质释放,导致微血管通透性增加,水外渗至组织间引起水肿。由于供氧不足代谢异常使得局部乳酸堆积,产生细胞毒副效应,影响细胞膜通透性使得心肌细胞水肿。一项关于烧伤所致大鼠心肌水肿的研究中发现,烧伤导致大鼠心肌组织明显水肿,此外通过检测发现大鼠心肌组织中AQP1蛋白表达也明显增多,研究发现心肌水肿程度与AQP1蛋白表达呈正相关,说明AQP1可能参与介导了烧伤后心肌组织缺血缺氧性所致心肌水肿的病理进程。心肌水肿这一病理现象本身对心肌组织存在巨大影响,水肿压迫会导致微循环异常,影响组织供血供氧,二者相互作用形成恶性循环,除此以外,它会影响心室舒张收缩功能。而心肌水肿会导致电传导异常,引发恶性心律失常,增加死亡率。心肌水肿还会引发心肌纤维化引起心肌结构改变导致心室重构。另外有研究显示,汞离子(Hg2+)通过抑制AQPs来降低细胞水肿减少线粒体膜,抑制凋亡,表明AQPs在细胞凋亡中起到一定作用。此外,多个研究发现通过下调AQP1表达,可减轻细胞水肿,减少细胞凋亡,但未见到AQP1关于心肌细胞凋亡的相关报道。本研究拟就AQP1在病理状态下心肌组织中表达情况来探讨其对心室重构的影响。本研究关键点是寻找一种切实可行的AQP1抑制剂,已经有大量关于调节AQP1蛋白表达的研究,这些研究涉及到的影响因素包括高渗环境、低氧状态、激素水平、磷酸化诱导、汞离子、乙酰唑胺、RNA干扰因子等等,以上诸多因素,要么操作困难,要么存在毒副作用,很难用于临床治疗,碳酸酐酶抑制剂乙酰唑胺（Acetazolamide,AZA）是一个老药,在临床中用于多种疾病,因其能抑制AQP1表达,推测在治疗缺血再灌注损伤方面有其潜在推广和应用价值。曾有关于肾脏组织的研究发现它可抑制AQP1的水转运,可降低肾小管水通透性。在雪旺细胞体外培养的研究中也发现加入AZA后,低氧所诱导AQP1转录与表达受到明显抑制,说明AZA能显着抑制AQP1表达。还有关于AZA的研究表明它能可逆性抑制爪蟾卵母细胞AQP1的通透性,并能够降低瘤组织中AQPl的表达减少肿瘤侵袭转移。但AZA对心肌细胞AQP1表达影响未见报道。以前大量关于炎症因子的研究发现,许多心脏疾病均会导致肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-a,TNF-α）,白介素-6（interleukin-6,IL-6）等炎性细胞因子表达增加,这些因子在疾病发生转归的病理过程中起到重要作用,炎症反应能够加速心肌肥大引起心室重构。IL-6干预的心肌细胞可导致心肌细胞蛋白质合成增多,一些导致心肌肥厚的蛋白因子表达也会增加,如P-肌球蛋白重链(（P-myosin heavy chain,P-MHC）。研究发现,TNF-α升高不仅导致心肌细胞肥大,远期观察发现其具有较高的心衰率和死亡率。众多研究均发现,心肌细胞作为TNF-α作用的靶细胞,高浓度TNF-α可导致心肌细胞肥大引起心室重构。另外,研究表明IL-6、TNF-α还影响心肌收缩舒张功能。目前无关于AQP1与炎症因子相关性的研究。P38是丝裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinase,MAPK）家族重要一员,是机体内的一条重要的炎症信号介导通路,参与多种炎症反应并促使细胞凋亡,其参与心、脑、肾的缺血再灌注损伤的发生,除介导炎症反应外,研究表明,前列腺癌细胞在缺氧条件下AQP1表达水平与P38MAPK活化程度相关。另有关于胸膜间皮细胞的研究发现,应用肽聚糖抑制P38MAPK活化,可以抑制缺氧所诱导的AQP1的表达升高。心肌细胞中AQP1表达与P38MAPK是否相关尚无报道。虽然关于AQP1的研究很多,但对于其在心肌中表达规律以及其对心室重构的影响鲜有报道。本研究主要观察心肌在缺血和压力超负荷情况下AQP1表达情况,并选取AZA为干预手段,研究它对心肌组织中AQP1表达的影响,观察这一治疗手段对心脏含水量、心脏重量、细胞凋亡、心脏超声指标的影响,从而探讨AZA能否有效抑制心室重构。另外同时观察心肌组织中IL-6,TNF-α水平,以及P-P38MAPK表达情况,以期进一步研究早期心室重构的病理过程,探讨在心室重构中这几者之间的相互作用,为心室重构治疗提供进一步理论依据。本研究分为四部分进行:第一部分AQP1在小鼠心肌缺血再灌注损伤中的表达规律及作用。第二部分AZA通过降低AQP1转录与表达抑制小鼠心肌缺血再灌注损伤所致的早期心室重构。第三部分AQP-1在小鼠压力超负荷模型中的表达规律及作用。第四部分AZA通过降低AQP1转录与表达抑制小鼠压力超负荷所致的早期心室重构。第一部分AQP1在小鼠心肌缺血再灌注损伤中的表达规律及作用目的:探讨缺血条件下AQP1表达水平、炎症因子IL-6、TNF-α水平以及P38MAPK磷酸化水平,以及几者之间的相关关系,并观察心肌水肿情况,并探讨AQP1过表达与心肌水肿发生与持续的关系。进而为如何预防缺血再灌注后心肌水肿,保护受损心肌提供研究方向。方法:为检测IL-6,TNF-α,P-P38 MAPK,AQP1在小鼠MI/RI后的表达水平及规律,将80只小鼠随机分为以下2组,A组:假手术组:按照MI/RI造模方法开胸手术,只穿线不结扎前降支。B组按照MI/RI造模方法,结扎冠脉前降支30分钟。两组分别于4小时、12小时、24小时、48小时、72小时、5天、7天、14天等时间点行实验动物取材,以颈椎脱臼处死小鼠,迅速打开胸腔,取出心脏,用4℃预冷生理盐水冲洗,组织匀浆检测心肌组织IL-6,TNFα水平,Western Blot检测P-P38 MAPK、AQP1相对蛋白表达,干湿重法测心肌组织水含量。结果:小鼠手术结扎前降支后,可见缺血相关改变。在各时间点观察心脏外形,在48小时后MI/RI组心脏较非手术组明显增大,考虑由于心肌缺血再灌注所致心室重构可能性大。MI/RI小鼠各时间点AQP1蛋白表达量均明显高于假手术组,从术后4小时至24小时呈轻度下降趋势,自术后24小时至术后1周表达量呈急剧增加趋势,至术后1周达到高峰。MI/RI组小鼠心肌组织中IL-6、TNF-α水平在各时间点均明显高于对照组,从术后4小时开始升高,24小时达到峰值,此后浓度逐渐下降,但在1周前都处于较高水平。MI/RI组在各个时间点P-P38 MAPK蛋白表达量均明显高于假手术组,从术后4小时开始升高,48小时达到峰值,此后蛋白表达量逐渐下降。MI/RI组小鼠各时间点左室心肌水含量均高于对照组,术后4小时开始增加至12小时达峰,后开始下降至48小时降至最低,自术后48小时开始心肌含水量再次增加,至术后5天达最高峰,至术后1周都维持在一个较高水平,后呈下降趋势。AQP1与P-P38 MAPK表达量存在相关性。P-P38 MAPK蛋白相对表达量与TNF-α存在相关性。48小时前各时间点左室心肌水含量与IL-6、TNF-α相关。48小时以后左室心肌水含量与AQP1密切相关性。结论:缺血再灌注损伤可导致心肌水肿,心室重构,心脏外形几何结构改变,导致心室腔体积明显增大。缺血再灌注损伤导致AQP1表达量明显升高,其表达水平与小鼠心肌组织含水量密切相关,尤其是48小时后与心肌组织含水量相关性更加明显。缺血再灌注损伤早期心肌组织中IL-6、TNF-α明显升高,并与早期心肌水肿密切相关,IL-6、TNF-α是介导心室早期重构的重要因素之一。小鼠心肌AQP1蛋白表达与P38MAPK磷酸化密切相关。TNF-α水平与P-P38MAPK表达具有相关性。第二部分AZA通过降低AQP1表达抑制小鼠心肌缺血再灌注损伤所致的早期心室重构目的:探讨AZA干预是否能够改善心肌缺血再灌注所导致的早期心室重构,并探讨AZA是通过何种途径起到影响早期心室重构的作用。方法:40只C57BL/6小鼠随机分为四组,每组各10只:假手术组（sham组）,假手术+乙酰唑胺组（sham+AZA组）,缺血再灌注损伤组（MI/RI组）:缺血再灌注损伤+乙酰唑胺组（MI/RI+AZA组）。于手术后1周,乙醚麻醉小鼠后超声心动图检测心脏结构大小及心功能情况,然后,颈椎脱臼处死小鼠,取出心脏,计算心重/体重比（HW/BW）,取部分缺血部位心肌组织行切片染色,观察细胞形态及凋亡情况,另取部分心肌组织进行匀浆后查心肌组织炎性因子表达水平,RT-PCR和Western blot分别检测AQP1的mRNA和蛋白表达,Western blot检测P-P38MAPK的蛋白表达,干湿重法计算心肌水含量。结果:与对照组组比较,MI/RI组心脏体积明显增大,室腔扩大。HE染色,MI/RI组心肌细胞水肿明显,结构破坏,心肌纤维紊乱、间隙增宽,可见大量炎症细胞浸润。AZA干预能够降低心脏扩大,减少心肌细胞水肿,结构破坏,以及炎症细胞浸润。TUNEI染色,MI/RI组心肌细胞凋亡率明显高于对照组,AZA干预能明显降低MI/RI诱导的细胞凋亡。MI/RI组AQP1蛋白相对表达量和mRNA的相对表达量显着高于对照组。AZA干预能够降低MI/RI小鼠心肌组织AQP-1蛋白及mRNA的表达。MI/RI组心肌组织中IL-6、TNF-α水平均明显高于对照组AZA干预能够降低MI/RI小鼠心肌组织中IL-6、TNF-α水平。MI/RI组P-P38 MAPK蛋白相对表达量显着高于对照组。AZA干预能够降低MI/RI小鼠心肌组织P-P38 MAPK蛋白的相对表达量。MI/RI组心肌组织水含量,心脏重量/体重（HW/BW）比值均明显高于对照组。AZA治疗能够降低MI/RI小鼠心肌组织水含量、HW/BW值。MI/RI组IVSD、LVAWD以及IVSS均明显厚于对照组,LVAWS要薄于对照组,LVEDD和LVESD明显大于对照组、LVEF低于对照组AZA干预能够改善MI/RI所致的LVEF降低,以及MI/RI所致LVEDD、LVESD变大以及LVAWD增厚,但对IVSD,IVSS,以及LVAWS改变无显着影响。结论:缺血再灌注损伤可导致心肌细胞水肿,结构破坏,细胞凋亡、心脏体积增大,心室重构;导致AQP1转录与表达增加,进而引起心肌细胞水肿、细胞凋亡增加,心肌组织水含量以及HW/BW比值增加,并导致左心室体积扩大,心脏功能下降,发生心室重构。AZA干预能够明显降低AQP1的转录与表达,减轻心肌细胞水肿,减少细胞凋亡,降低心肌水含量,减少心脏体积质量,改善心脏结构及功能作用,抑制心室重构,但对心肌肥厚影响不明显。AZA干预能够降低MI/RI所致的P-P38MAPK蛋白的表达增高。AZA干预还降低了MI/RI所致心肌组织中IL-6、TNF-α水平升高,进而可能起到减少细胞凋亡,延缓心室重构的作用。第三部分AQP-1在小鼠压力超负荷模型中的表达规律及作用目的通过观察不同时间点压力超负荷小鼠IL-6,TNF-α,P-P38MAPK,AQP1表达水平,以及各时间点心肌含水量,来探讨心肌压力超负荷条件下AQP1过表达与心肌水肿的相关性,以及与炎症因子IL-6,TNF-α水平、P38-MAPK磷酸化水平的相关性。方法将80只小鼠随机分为以下2组,A组:假手术组（sham组）:按照造模方法开胸手术,只穿线不结扎主动脉弓。B组主动脉弓缩窄术组（TAC组）按照主动脉弓缩窄术造模,部分结扎主动脉弓。两组分别于4小时、12小时、24小时、48小时、72小时、5天、7天、14天等时间点行实验动物取材,以颈椎脱臼处死小鼠,迅速打开胸腔,取出心脏,用4℃预冷生理盐水冲洗,组织匀浆检测心肌组织IL-6,TNFα水平,Western Blot检测P-P38 MAPK、AQP1相对蛋白表达,干湿重法测心肌组织水含量。结果心肌压力超负荷导致心肌损伤心室重构。TAC组小鼠心肌组织中IL-6、TNF-α水平在各时间点均明显高于对照组。sham组AQP1表达在各时间点比较恒定,各时间点间差异无统计学意义。TAC组小鼠AQP1蛋白表达量从术后4小时开始明显增加,至术后72小时达到高峰,后有所下降,至术后14天仍在一个较高水平。与sham组比较,TAC组各时间点AQP1蛋白表达量均显着升高。TAC组小鼠P-P38 MAPK蛋白表达量从术后4小时开始明显增加,至术后48小时达到高峰,后有所下降,至术后14天仍在一个较高水平。与sham组比较,TAC组各时间点P-P38MAPK蛋白表达量均显着升高。sham组左室心肌水含量在各时间点比较恒定,各时间点间水含量差异无统计学意义。TAC组小鼠左室心肌水含量从术后4小时开始增加至5d达峰,后开始稍有下降至术后14天仍在较高水平。结论压力超负荷可导致心肌水肿,心室重构,心脏外形几何结构改变,导致心脏体积明显增大。压力超负荷导致AQP1表达水平明显升高,并与小鼠心肌组织含水量密切相关。压力超负荷导致心肌组织中IL-6、TNF-α明显升高,并与心肌水肿相关。P38MAPK磷酸化水平与小鼠心肌AQP1蛋白表达具有相关性。第四部分AZA通过降低AQP1表达抑制小鼠压力超负荷所致的早期心室重构目的:探讨压力超负荷对小鼠心肌细胞肥大,心肌水肿、心肌细胞凋亡以及心室重构的影响,并分析AQP1在其中起到的作用,AZA干预是否能够改善上述指标。方法:40只C57BL/6小鼠随机分为四组,每组各10只:假手术组,假手术+乙酰唑胺组,主动脉弓缩窄术（TAC）组,主动脉弓缩窄术+乙酰唑胺（TAC+AZA）组。于手术后2周,乙醚麻醉小鼠后超声心动图检测心脏结构大小及心功能情况。颈椎脱臼处死小鼠,取出心脏,计算心重/体重比（HW/BW）,取部分缺血部位心肌组织行切片染色观察细胞形态及凋亡情况,另取部分心肌组织进行匀浆后查心肌组织炎性因子表达水平,Western blot检测P-P38 KMAP的蛋白表达,RT-PCR和Western blot分别检测AQP1的mRNA和蛋白表达,干湿重法计算心肌水含量。结果:与对照组相比,TAC模型组小鼠心脏体积增大,几何形状改变,左心室腔扩大;HE染色肌细胞水肿、肥大、形态不规则,细胞间隙增大;AZA干预能够减少心肌细胞水肿、肥大,降低细胞结构破坏,抑制心脏扩大;TUNEI染色可见,TAC组心肌细胞凋亡率明显高于对照组;AZA干预能明显降低TAC诱导的细胞凋亡;TAC组AQP1 mRNA和蛋白相对表达量显着增高,AZA干预能够降低TAC小鼠心肌组织AQP-1 mRNA及蛋白的表达;TAC组心肌组织中IL-6、TNF-α水平均明显升高;AZA干预能够降低TAC诱导的IL-6、TNF-α升高;TAC组P-P38 MAPK蛋白相对表达量显着增高;AZA干预能够降低TAC小鼠心肌组织P-P38 MAPK蛋白的相对表达量,TAC组心脏重量/体重（HW/BW）,心肌组织水含量均明显升高,AZA治疗能够降低TAC小鼠心肌组织水含量、HW/BW值。与对照组比较,TAC组IVSD、IVSS及LVPWD均明显增厚,而LVEDD明显降低,LVEF明显降低,AZA治疗的TAC组小鼠LVEF明显改善,对于TAC所致的IVSD、IVSS、LVPWD和LVEDD改变没见明显影响。结论:压力超负荷可导致心肌细胞水肿,肥大,结构破坏,心脏体积增大,心室腔几何结构改变,导致心室重构;导致AQP1转录与表达增加,进而引起心肌细胞水肿、细胞凋亡增加,心肌组织水含量以及HW/BW比值增加,并导致左心室体积扩大,心脏功能下降;AZA干预能够明显降低AQP1的转录与表达,减轻心肌细胞水肿,减少细胞凋亡,降低心肌水含量,减少心脏体积质量,改善心脏功能作用。AZA干预能够降低P-P38MAPK蛋白的表达增高。AZA干预还降低了压力超负荷所致的心肌组织中IL-6、TNF-α水平升高,降低炎症反应,进而可能起到减少细胞凋亡,进而达到改善心功能的作用。
张智昱,武娟,李学军[4]（2018）在《水通道蛋白1在肿瘤进展中的作用及其抑制剂研究进展》文中认为水通道蛋白1（AQP1）是细胞膜上的疏水跨膜蛋白,能够介导水分子的跨膜转运,同时也是AQP家族中第一个被发现的水通道蛋白。研究表明,AQP1在肿瘤细胞增殖迁移、血管生成及肿瘤的发展和演进中发挥作用,或许将成为潜在的肿瘤治疗靶点。本文将主要从AQP1的结构功能、在肿瘤进展中的作用及其抑制剂等方面进行综述。
陈伟娜[5]（2018）在《AQP1抑制剂乙酰唑胺对佐剂性关节炎大鼠的治疗作用及其对IL-1β诱导大鼠关节软骨细胞凋亡的影响》文中提出类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis,RA）是一类自身免疫性疾病,主要以慢性滑膜炎症、软骨和骨质破坏为主要特征,是造成人群致残和丧失劳动力的主要病因之一。目前RA的发病机制尚未完全阐明,研究证明滑膜组织过度增生和关节软骨损伤与RA不可逆残障具有直接关系,积极探索RA滑膜过度增生和软骨损伤的可能机制及其创新药物具有重要意义。水通道蛋白（aquaporins,AQPs）是与水通透性相关的膜转运蛋白,目前在哺乳动物中已克隆和鉴定出13种AQPs（AQP0-12）,AQPs结构中存在对pH值敏感的区域和渗透压反应元件,在RA发病过程中,滑膜炎导致关节局部组织酸化、关节腔内滑液PH值下降,软骨基质大量降解进入关节腔引起渗透压改变,上述因素均可能导致滑膜组织中AQPs活化。既往文献表明RA滑膜组织中AQP1存在异常高表达,与RA滑膜炎症、关节积水和软骨/骨损伤等密切相关,干预AQP1可能是遏制RA滑膜炎和关节损伤的关键环节和有效措施。乙酰唑胺（Acetazolamide,AZ）作为一种碳酸苷酶抑制剂可以抑制AQP1介导的水渗透性,还能直接抑制AQP1蛋白表达,具有抑制肿瘤转移和血管生成的能力。在本研究中,我们使用AZ作为合适的AQP1抑制剂,观察AZ对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用并探讨其可能机制,为RA的防治提供新靶点和新思路。本研究主要分为以下两个方面的内容:1.乙酰唑胺对佐剂性关节大鼠的治疗作用及相关机制研究目的:研究乙酰唑胺（AZ）对大鼠佐剂性关节炎（adjuvant-induced arthritis,AIA）的影响及其相关机制。方法:完全弗氏佐剂对大鼠左后足皮下注射制备AIA模型,不同剂量AZ灌胃给药。足肿胀仪检测继发侧足肿胀度并进行关节炎指数评分,ELISA法检测血清TNF-α和IL-β的水平,HE染色观察踝关节病理组织学变化,阿利新蓝染色法检测软骨中蛋白多糖的表达。实时荧光定量PCR法检测软骨组织中Ⅱ型胶原（COⅡ）和聚集蛋白多糖（Aggrecan）的mRNA水平。Western-blot法检测滑膜组织中AQP1、IκBα、p-IκBα、NF-κB p65和p-NF-κB p65的蛋白表达。结果:AZ能抑制AIA大鼠后足肿胀和关节炎指数,降低血清TNF-α,IL-β的水平,改善踝关节病理组织学指标。AZ能增加软骨组织中蛋白聚糖的产生及Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖mRNA的表达。AZ能降低滑膜组织中AQP1的蛋白表达,此外,AZ抑制IκBα的降解和磷酸化,降低p-NF-κB p65的蛋白表达,进而抑制NF-κB通路的激活。2.乙酰唑胺对IL-1β诱导的大鼠关节软骨细胞凋亡的影响及机制研究目的:探讨AQP1抑制剂乙酰唑胺（AZ）对IL-1β诱导的大鼠关节软骨细胞凋亡的影响及机制。方法分离培养大鼠关节软骨细胞主要采用胰酶-胶原酶法,IL-1β诱导软骨细胞凋亡,AZ体外处理IL-1β刺激的关节软骨细胞,MTT法检测细胞增殖,hoechst 33342染色、Annexin V-FITC/PI双染和rhodamine-123染色检测细胞凋亡,Westernblot检测AQP1,Bcl-2,Bax,Caspase3,IκBα,p-IκBα,NF-κB p65和p-NF-κB p65的蛋白表达。结果AZ（12.5、25、50μmol/L）剂量依赖性地提高IL-1β诱导的软骨细胞增殖;AZ可以抑制IL-1β诱导的大鼠关节软骨细胞凋亡,表现为减少细胞凋亡形态学改变、降低软骨细胞凋亡率和提高软骨细胞线粒体膜电位;与正常组比较,IL-1β组AQP1蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达降低,Bax和Caspase3蛋白表达升高,IκB蛋白表达下降,p-IκBα和p-NF-κB p65蛋白表达增加;与IL-1β组比较,AZ抑制AQP1表达,提高Bcl-2表达,降低Bax和Caspase3表达,抑制IκBα的降解和磷酸化,并减少p-NF-κB p65蛋白表达。结论AZ体外能抑制IL-1β诱导的关节软骨细胞凋亡,项结果可能与下调Caspase3和Bax（均为促凋亡基因）表达、上调Bcl-2（抗凋亡基因）表达及抑制NF-κB炎症通路活化有关。
李学军[6]（2017）在《AQP1蛋白与碳酸酐酶抑制剂的相互作用及药物研究》文中进行了进一步梳理AOPs水通道蛋白涉及某些临床疾病的发病过程,如脑水肿、肺水肿、青光眼和肿瘤等。我们前期的研究证明了碳酸酐酶（CAs）抑制剂（乙酰唑胺和托毗酯）可以在体内和体外显着抑制AQP1的表达,并且可以抑制水分子通过细胞膜的功能。我们还观察到两种药物可以通过抑制AQP1而抑制肿瘤转移,并证实这些化合物可在肿瘤组织中显着产生抗血管生成作用,且其机制与抑制AQP1有关。已有人证实,乙酰唑胺可以抑制AQP1和/或AQP4水转运的功能。并且AQP1可与CAII协同产生促进水的跨细胞膜转运。
姬逸男[7]（2017）在《AQP1在人乳腺癌中的表达及功能研究》文中进行了进一步梳理第一部分:AQP1在人乳腺癌组织中的表达及其与患者临床病理特征的关系目的:检测乳腺癌及其癌旁组织和乳腺良性病变中AQP1的表达差异,并分析乳腺癌组织中AQP1的表达与患者年龄、肿瘤的大小、组织学类型、组织学分级、淋巴结转移、远处转移、激素受体状态、HER-2状态等临床病理特征的关系。方法:1.人乳腺相关样本组织:收集2013年1月至2015年1月在广西医科大学附属肿瘤医院行手术切除的118例乳腺癌组织、65例癌旁组织及32例乳腺良性病变的蜡块标本。2.应用免疫组织化学方法检测乳腺癌及其癌旁组织与乳腺良性病变中AQP1蛋白的表达情况,比较三者之间的表达差异;分析乳腺癌组织中AQP1的表达情况及其与临床病理参数的相关性。结果:1.AQP1在乳腺癌组织、癌旁组织及乳腺良性病变均有表达。AQP1在乳腺癌组织的表达水平要明显高于癌旁组织（44.9%vs 13.4%,χ2=18.060,P=0.000）与良性病变（44.9%vs 18.7%,χ2=7.222,P=0.007）;而癌旁组织与良性病变中AQP1的表达无明显差异（13.4%vs 18.7%,χ2=0.394,P=0.530）。2.AQP1与乳腺癌临床病理特征的关系:AQP1在ER、PR受体或HER-2阴性乳腺癌患者中的表达水平要高于ER、PR受体或HER-2阳性的乳腺癌患者（55.2%vs 35.0%,χ2=4.851,P=0.028;53.6%vs 32.7%,χ2=5.093,P=0.024;52.1%vs 33.3%,χ2=3.944,P=0.047）。乳腺癌伴有淋巴转移或远处转移时AQP1的表达水平更高（59.0%vs 29.8%,χ2=5.027,P=0.025;84.6%vs 40.0%,χ2=9.307,P=0.002）。而AQP1的表达情况与乳腺癌组织学类型、组织学分级、年龄、肿瘤大小无明显相关性（所有P值>0.05）。3.AQP1在不同乳腺癌分子分型中的表达情况:AQP1在三阴型乳腺癌（83.3%）表达水平最高,但与HER-2过表达型（64.7%）差异不明显（χ2=1.872,P=0.171）,而Luminal A/Luminal B1型和Luminal B2型均低于三阴型（36.7%vs 83.3%,χ2=14.016,P=0.000;14.3%vs 83.3%,χ2=24.791,P=0.000）和HER-2过表达型（36.7%vs 64.7%,χ2=4.009,P=0.045;14.3%vs 64.7%,χ2=12.101,P=0.001）。结论:1.AQP1在乳腺癌组织的表达水平要高于癌旁组织和乳腺良性病变组织,而乳腺癌旁组织与乳腺良性病变组织内AQP1的表达无显着性差异。2.AQP1在雌激素受体、孕激素受体阴性乳腺癌患者中的表达显着高于雌激素受体、孕激素受体阳性者,而HER-2阴性乳腺癌患者中的AQP1表达略高于HER-2阳性患者。3.伴有淋巴转移或远处转移乳腺癌患者中AQP1的表达水平高于不伴淋巴转移或远处转移者。4.不同分子分型乳腺癌中AQP1的表达存在差异:AQP1在三阴型乳腺癌中表达水平最高,其次是HER-2过表达型,这两个分子亚型中AQP1的表达高于Luminal A/Luminal B1型和Luminal B2型。第二部分:AQP1在人乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231、SK-BR-3及正常乳腺上皮细胞MCF-10A中的表达情况目的:分析代表不同分子分型的人乳腺癌细胞株中AQP1的表达,找出优势表达株,为进一步探讨AQP1在人乳腺癌细胞中的功能研究奠定基础。方法:1.应用实时荧光定量PCR测定MCF-7、MDA-MB-231、SK-BR-3及MCF-10A细胞中AQP1 m RNA的表达。2.应用蛋白质免疫印迹方法检测MCF-7、MDA-MB-231、SK-BR-3及MCF-10A细胞中AQP1蛋白表达情况。结果:1.实时荧光定量PCR检测结果显示,人正常乳腺上皮细胞株MCF-10A中AQP1 m RNA的表达量低于人乳腺癌细胞株MCF-7（1.272±0.337 vs2.639±0.653,P=0.004）、MDA-MB-231（1.272±0.337 vs 5.325±1.031,P=0.000）、SK-BR-3（1.272±0.337 vs 4.240±0.714,P=0.000）。而且在乳腺癌细胞株MDA-MB-231中AQP1 m RNA的表达量最高,明显高于MCF-7（5.325±1.031 vs 2.639±0.653,P=0.000）和SK-BR-3（5.325±1.031 vs4.240±0.714,P=0.018）。2.蛋白质免疫印迹结果发现,人正常乳腺上皮细胞株MCF-10A中AQP1蛋白的表达量低于人乳腺癌细胞株MCF-7（0.178±0.028 vs 0.381±0.038,P=0.001）、MDA-MB-231（0.178±0.028 vs 0.865±0.067,P=0.000）、SK-BR-3（0.178±0.028 vs 0.810±0.038,P=0.000）。而且在乳腺癌细胞株中MDA-MB-231AQP1蛋白的表达量最高,但与SK-BR-3（0.865±0.067 vs0.810±0.038,P=0.168）差异无统计学意义,而MCF-7的AQP1蛋白表达量明显低于MDA-MB-231（0.381±0.038 vs 0.865±0.067,P=0.000）和SK-BR-3（0.381±0.038 vs 0.810±0.038,P=0.000）。结论:1.高侵袭性人乳腺癌细胞株MDA-MB-231、SK-BR-3中AQP1蛋白水平和m RNA水平的表达均高于低侵袭性乳腺癌细胞株MCF-7,其中在MDA-MB-231的表达最高。2.结合前期免疫组化结果,我们将选择MDA-MB-231细胞作为进一步研究AQP1生物学功能实验的细胞株。第三部分RNA干扰AQP1基因表达对MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响目的:探索干扰AQP1基因表达后,对MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法:1.将慢病毒载体（AQP1-shRNA-LV）转染至MDA-MB-231细胞。利用实时荧光定量PCR法及蛋白质免疫印迹法分别检测RNA干扰后MDA-MB-231细胞（实验组）AQP1基因及蛋白的表达,并与转染了慢病毒载体（NC-shRNA-LV）的MDA-MB-231细胞组（阴性对照组）和未转染的MDA-MB-231细胞组（空白对照组）进行对比。2.通过CCK-8细胞增殖实验及平板克隆形成实验,来检测AQP1基因干扰前后对MDA-MB-231细胞增殖能力的影响;3.通过划痕实验及Transwell小室迁移实验检测AQP1基因干扰前后对MDA-MB-231细胞迁移能力的影响;4.通过Transwell小室侵袭实验检测AQP1基因干扰前后对MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响。结果:1.实时荧光定量PCR法结果显示干扰组MDA-MB-231细胞AQP1 mRNA表达量明显低于空白对照组、阴性对照组（P均小于0.05）。蛋白质免疫印迹法结果显示干扰组MDA-MB-231细胞AQP1蛋白表达量明显低于空白对照组、阴性对照组（P均小于0.05）。2.CCK-8细胞增殖实验及克隆形成实验发现,RNA干扰AQP1基因后,MDA-MB-231细胞的增殖能力下降（P<0.05）;3.划痕实验及transwell迁移、侵袭实验发现,RNA干扰AQP1基因后,MDA-MB-231细胞的迁移、侵袭能力下降（P<0.05）。结论:AQP1-shRNA-LV可有效沉默AQP1基因,成功建立了稳定转染的MDA-MB-231细胞株,为下一步研究AQP1的功能奠定基础。AQP1-shRNA-LV可显着降低MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭能力,干扰AQP1表达可能为乳腺癌,尤其是三阴型乳腺癌的治疗提供新思路。第四部分RNA干扰AQP1基因表达对MDA-MB-231细胞裸鼠皮下移植瘤模型的影响目的:应用AQP1-shRNA-LV干扰乳腺癌细胞株MDA-MB-231中AQP1的表达,研究AQP1-shRNA-LV对裸鼠移植瘤的影响。方法:将实验组（转染AQP1干扰慢病毒AQP1-shRNA-LV的MDA-MB-231细胞组）、阴性对照组（转染阴性对照慢病毒NC-shRNA-LV的MDA-MB-231细胞组）和空白对照组（亲本MDA-MB-231细胞组）分别接种于裸鼠皮下乳腺脂肪垫,建立裸鼠移植瘤模型。记录皮下移植瘤的成瘤时间,成瘤后每5天观察记录每组裸鼠皮下移植瘤的体积和重量变化。动态观察皮下移植瘤生长状况,35天后颈椎脱臼处死裸鼠,剥离移植瘤,比较各组移植瘤的大小和重量;并分别取裸鼠肺脏进行石蜡组织包埋,HE染色病理观察实验组、阴性对照组、空白对照组的裸鼠肺转移瘤情况。结果:1.实验组的裸鼠皮下移植瘤生长速度明显慢于阴性对照组及空白对照组。空白对照组、阴性对照组、实验组的瘤体平均体积分别为:721.01±383.92mm3、656.07±330.67mm3、279.09±110.10mm3,三组间比较差异有统计学意义（F=8.895,P<0.05）,两两比较,实验组均明显小于空白对照组（P<0.05）及阴性对照组（P<0.05）。空白对照组、阴性对照组、实验组的瘤体平均重量分别为:0.61±0.34g、0.56±0.28g、0.27±0.11g,三组间比较差异有统计学意义（F=7.124,P<0.05）,两两比较,实验组均明显轻于阴性对照组（P<0.05）及空白对照组（P<0.05）。2.实验组未出现裸鼠肺转移,其出现肺转移的机率似乎低于空白对照组（3只）及阴性对照组（2只）,但无显着性差异,P值分别为0.222和0.481。结论:1.干扰乳腺癌细胞AQP1的表达,可以明显抑制移植瘤的生长速度。2.干扰乳腺癌细胞AQP1的表达,可能降低移植瘤自发转移的机率。
胡皓[8]（2017）在《AQP1在大鼠雪旺氏细胞及面神经水肿中表达调控机制的实验研究》文中研究表明[研究背景]解剖学研究发现走行于颞骨部的面神经由于通过坚硬狭窄的骨性面神经管,在损伤后水肿缺血不能及时缓解,最终导致变性坏死,出现不同程度的面神经瘫痪。由于目前缺乏理想的治疗手段,所以研究面神经水肿发生机制,找到水肿损伤形成和持续的方法,避免面神经进一步变性坏死是面神经损伤治疗的方向之一。水通道蛋白（AQPs）是一类高效介导跨膜水转运的特异性通道蛋白,在水液代谢的调节中起重要作用,参与人体多种组织器官水肿的形成和消除。前期通过动物面神经损伤模型的研究,AQP1在面神经组织上表达趋势与神经水肿程度相似,且主要定位于雪旺氏细胞上,调控其表达可调节雪旺氏细胞的肿胀程度。根据研究报道乙酰唑胺能有效抑制AQP1的表达,我们也在前期工作中证实乙酰唑胺对雪旺氏细胞表达有负性调节作用。但是对于AQP1在雪旺氏细胞和面神经水肿形成过程中的表达调控机制,目前尚无研究报道。由于目前缺乏从整体水平对AQPs的功能及其表达调控机制进行研究,因此,结合前期研究基础,本课题通过对雪旺氏细胞水肿模型和面神经损伤动物模型的研究,运用细胞生物学、分子生物学等实验方法分别在体外和体内研究水肿状态下AQP1的表达调控机制及乙酰唑胺干预条件下对AQP1的调控机制,并探讨其相互之间的关系,为治疗早期面神经水肿提供全新的方向。[目的]1、研究AQP1表达变化与雪旺氏细胞水肿的关系及其表达调控机制;2、研究乙酰唑胺对AQP1表达调控与雪旺氏细胞水肿之间的关系;3、在面神经损伤动物模型上进一步验证调控AQP1表达导致面神经水肿的相关机制,为临床以水通道蛋白为靶点预防或治疗早期面神经水肿提供新思路。[方法]一、渗透压改变对雪旺氏细胞AQP1表达的影响及其表达调控的实验研究1、低渗液对大鼠雪旺氏细胞生物学特性及AQP1表达变化的影响A. RSC96大鼠雪旺氏细胞系培养及鉴定（1）细胞贴壁培养,细胞形态观察;（2）免疫荧光双标染色:S-100 （雪旺氏细胞特异性标志物）及AQP1表达;（3）蛋白质印迹法检测雪旺氏细胞中AQP1表达。B.构建低渗细胞水肿模型（1） 2组低渗液240mmol/L、150 mmol/L诱导细胞水肿;（2） CCK-8细胞活力检测及流式细胞早期凋亡评估模型标准及时间点;（3）低渗诱导细胞水肿形态变化及confocal动态监测细胞体积变化;（4）免疫荧光及Western-blot检测细胞水肿AQP1表达变化。2、渗透压改变对雪旺氏细胞MAPK信号通路的影响（1）复制细胞水肿模型;（2）细胞水肿模型分组:2组低渗液240mmol/L、150mmol/L,对照组以常规无血清DMEM培养;（3） Westem-blot检测MAPK各亚组蛋白磷酸化水平变化。3、MAPK在雪旺氏细胞水肿中对AQP1表达调控的实验研究（1）复制细胞水肿模型;（2）细胞水肿模型分组:ERK/p38组;对照组,模型组,抑制剂干预组,干预组将待处理细胞预先加入MAPK特异性抑制剂作用1h后,再加入低渗液体;（3） Western-blot 检测 AQP1 表达变化。二、乙酰唑胺对大鼠雪旺氏细胞AQP1表达调控的初步研究1、慢病毒介导的AQP1过表达对大鼠雪旺氏细胞生物学特性影响的实验研究（1）AQP1过表达构建:将目的基因克隆到慢病毒载体,鉴定克隆正确连接（PCR和测序）,过表达质粒与包装质粒共转染293T细胞,慢病毒转染雪旺氏细胞制备AQP1过表达稳转株模型;（2）细胞周期测定过表达细胞与阴性对照细胞差异;（3）免疫荧光半定量及蛋白质印迹法检测感染后雪旺氏细胞AQP1蛋白表达变化。2、乙酰唑胺AZA抑制AQP1表达与MAPK信号级联之间的实验研究（1）利用CCK-8检测乙酰唑胺对雪旺氏细胞毒性,筛选合适的药物浓度;（2）不同浓度梯度的AZA作用于过表达稳转株（OE）,Westem-blot检测干预12h后AQP1蛋白变化情况;（3） AZA干预AQP1过表达稳转株后,免疫印迹法观察0-12h MAPK蛋白磷酸化变化水平;（4）细胞分为正常对照组,乙酰唑胺抑制组,乙酰唑胺抑制干预组,干预组将待处理细胞预先加入MAPK特异性抑制剂作用1h后,再加入乙酰唑胺干预12h,观察AQP1蛋白变化情况。3、AZA对AQP1表达变化的穿梭机制研究（1）利用构建的OE进行免疫沉淀（IP）,将沉淀的蛋白液行质谱分析,筛选可能与AQP1互相作用的细胞骨架蛋白（MYH14）及泛素蛋白（Ub）;利用免疫荧光共标染色验证AQP1与MYH14、Ub细胞内共定位;重复IP试验,验证乙酰唑胺干预下AQP1与MYH14的相互作用;（2） AZA干预OE12h,利用膜蛋白提取试剂盒提取细胞膜及细胞浆蛋白,免疫印迹法观察AZA干预后A.QP1转位表达情况;（3） MYH14-shRNA质粒构建与转染:将目的基因克隆到慢病毒载体,鉴定克隆正确连接（PCR和测序）,质粒转染雪旺氏细胞,构建的MYH14-shRNA利用免疫荧光观察转染效率,免疫印迹验证MYH14蛋白敲除水平;（4） MYH14-shRNA对细胞活力影响及泛素化抑制剂MG132药物浓度行CCK-8检测;（5）细胞分为正常对照组,AZA抑制组,AZA抑制干预组,干预组将待处理细胞预先敲除MYH14,再加入AZA,观察AQP1蛋白转位变化情况;（6）细胞分组正常对照组,乙酰唑胺抑制组,泛素抑制剂组、泛素抑制剂+乙酰唑胺干预组,干预组将待处理细胞预先MG132处理1h,再加入AZA,观察AQP1蛋白变化情况。三、AQP1在面神经水肿中的表达调控及治疗机制的实验研究1、大鼠面神经损伤模型的构建及评估（1）耳后切口入路构建大鼠面神经损伤模型:Wistar大鼠左侧:手术侧,右侧:自身对照侧;术后14天,对面神经核团区的脑干部位连续冰冻切片,对核团神经元计数;对面神经功能评分;（2）解剖获取面神经颞骨段面神经组织进行组织切片,免疫组化观察AQP1的分布和表达,判断AQP1的时相性变化;（3）免疫印迹法对颞骨段面神经组织内的AQP1蛋白的表达进行检测,验证AQP1蛋白水平的时相性变化趋势;2、面神经损伤对大鼠面神经组织MAPK信号通路的影响（1）重复构建动物模型,免疫印迹法检测面神经水肿形成时间内MAPK蛋白磷酸化变化情况;（2）动物模型分组,MAPK抑制剂筛选浓度验证体内ERK/p38抑制水平;3、MAPK在面神经水肿中对AQP1表达调控的实验研究动物模型分为ERK/p38两组:正常对照组,模型组,模型干预组,抑制剂空白对照组,干预组及抑制剂空白对照组术前给予预实验中摸索的药物浓度及给药方式,手术造模,免疫印迹法观察AQP1蛋白变化情况;四、数据统计学分析获得结果,为后续研究开辟思路。[结果]1、RSC96大鼠雪旺氏细胞表达AQP1,在不同渗透压诱导下,细胞水肿形成,AQP1 均于 6h 达高峰（150mM: P<0.001,240mM: P<0.01）;2、不同浓度的低渗溶液作用后均能激活p-ERK和p-p38蛋白磷酸化水平;150mmol/L组:p-ERK在30min时表达最强（P<0.001）,p-p38在1h时表达最强（P<0.001）; 240mmol/L 组:p-ERK 在 15min 时达最强（P<0.001）,p-p38 在 5min时达最强（P<0.001）。ERK抑制剂U0126中,两组低渗浓度组AQP1表达较低渗刺激组均明显降低（150mmol/L: P<0.05; 240mmol/L: P<0.001）,与对照组无明显统计学差异;p38抑制剂SB203580组AQP1蛋白表达较低渗处理降低（150mmol/L: P<0.05; 240mmol/L: P<0.001）,但仍高于正常对照组水平（P<0.01 ）。3、构建的AQP1过表达载体测序正确,转染雪旺氏细胞后AQP1蛋白表达明显增加（P<0.001）;乙酰唑胺干预12h后,蛋白水平明显降低（10-5mol/L:P<0.001,10-6mol/L: P<0.01）,AQP1 下调呈浓度依赖性（10-5:1 0-6mol/L: P<0.05）;4、乙酰唑胺干预细胞0-12h, p-ERK磷酸化水平6h表达最强（P<0.001 ）。ERK抑制剂U0126作用于细胞后,能明显阻断乙酰唑胺对AQP1的抑制作用（P<0.05）;5、MYH14-shRNA质粒测序正确,转染雪旺氏细胞后MYH14蛋白水平下降（P<0.01）,并对雪旺氏细胞活力无影响;6、乙酰唑胺干预细胞后,激活MAPK信号通路,下游细胞骨架蛋白MYH14与AQP1相互作用,从细胞浆向细胞膜转位,1h时表达量最高（P<0.01）,MYH14-shRNA转染细胞后,AQP1转位现象消失,膜AQP1表达下调（P<0.05）;7、细胞预处理MG132,泛素蛋白酶体通路被抑制,AZA对AQP1抑制作用消失（P<0.001）,证明AZA通过AQP1转位在细胞膜上激活泛素通路而降解;8、大鼠面神经损伤行为学观察,面神经功能评分均符合面瘫指标,面神经核团计数低于对照侧（P<0.05）;免疫组化及免疫印迹分析均在术后7dAQP1表达最高（P<0.001）;9、面神经损伤后大鼠体内激活ERK/p38信号通路,p-ERK/p-p38均在术后3d时达最强（P<0.001）,ERK抑制剂U0126,抑制剂干预组AQP1表达模型组降低（P<0.001）,与对照组无明显统计学差异;p38抑制剂SB203580组AQP1蛋白表达较模型组降低（P<0.001）,结论同细胞学水平类似,说明MAPK信号通路有可能参与面神经水肿形成中对AQP1表达调控。[结论]1、AQP1参与雪旺氏细胞水肿形成;2、MAPK在低渗诱导细胞水肿形成中参与AQP1的表达调控;3、乙酰唑胺在细胞内通过穿梭机制及泛素蛋白酶体通路完成对AQP1的表达调控;4、MAPK可能在大鼠面神经水肿形成中参与AQP1的表达调控。
张文杰[9]（2012）在《RNA干扰抑制水通道蛋白3对肠粘膜上皮屏障影响的实验研究》文中研究指明目的：探讨RNA干扰下调人AQP3基因表达对肠粘膜上皮屏障的影响，并探讨其可能的作用机制。方法：在Caco-2细胞系中检测AQP3基因的表达，构建沉默AQP3mRNA表达的shRNA慢病毒载体，转染Caco-2细胞系，建立稳定转染细胞系，荧光定量PCR以及Western blot验证其在mRNA和蛋白水平的干扰效率。体外建立肠粘膜上皮屏障，分为实验分为三组：空白对照组（CON）、阴性对照组（NC）、AQP3干扰组（RNAi），分别在第7，14，21，28天检测细胞跨膜电阻（TEER），荧光黄（Luciferyellow，LY）的通透性和易位的大肠杆菌（E.coli C25）的数量。Western blot验证紧密连接（TJ）相关蛋白的表达情况。并且采用免疫细胞化学法观察紧密连接相关蛋白，如Occludin蛋白，Claudin-1蛋白的分布和结构变化。结果：荧光定量PCR及Western blot结果显示shRNA慢病毒载体可有效沉默AQP3在Caco-2细胞系中的表达，与空载质粒组相比，RNA干扰组在第7，14，21天TEER明显降低，荧光黄的通透性增大并且易位的大肠杆菌（E.coli C25）的数量明显增多，各检测时间点RNAi组和空载质粒组比较均存在统计学差异（P﹤0.05）。Western blot结果显示AQP3干扰组紧密连接相关蛋白Occludin以及Claudin-1的表达明显降低。免疫细胞化学结果显示Caco-2细胞间Occludin以及Claudin-1主要表达在细胞膜和/或胞浆中，相邻Caco-2细胞间TJ结构遭到破坏。结论：靶向AQP3的shRNA技术通过对AQP3的有效沉默可明显降低肠粘膜屏障的完整性，为进一步探讨肠粘膜屏障损伤治疗提供新的思路。
张洁[10]（2012）在《碳酸酐酶抑制剂局部应用对大鼠角膜新生血管形成过程中水通道蛋白1表达的影响》文中认为背景研究表明，水通道蛋白1（AQP1）与大鼠碱烧伤后角膜新生血管（CNV）的形成密切相关，碳酸酐酶抑制剂具有抑制AQP1的作用，从而可间接抑制CNV，但其全身应用不良反应较重，因此局部碳酸酐酶抑制剂布林佐胺滴眼液对CNV的作用受到关注。目的研究局部应用布林佐胺滴眼液对大鼠碱烧伤后CNV形成过程中AQP1表达的影响。方法健康SD大鼠35只按随机数字表法随机分为正常对照组5只10只眼、模型组15只30只眼和布林佐胺组15只30只眼。模型组和布林佐胺组大鼠用浸有1mol/L NaOH溶液的星形滤纸贴附于角膜中央40s建立角膜碱烧伤大鼠模型，布林佐胺组大鼠在造模后用布林佐胺滴眼液点眼，正常对照组和模型组大鼠用生理盐水点眼。造模后3d裂隙灯下对角膜烧伤程度进行分级；造模后3、5、7、10d对大鼠角膜混浊度进行评分，同时测量CNV的生长面积。造模后第10天获取大鼠角膜组织并行苏木精－伊红染色观察大鼠角膜的组织病理学改变，透射电子显微镜下观察各组角膜超微结构的改变。应用免疫组织化学法检测AQP1及血管内皮生长因子（VEGF）在各组大鼠角膜中的表达。结果裂隙灯下模型组与布林佐胺组大鼠角膜碱烧伤的评分差异无统计学意义（t=0.97，P>0.05）。正常对照组大鼠角膜无水肿、混浊，无CNV生成；造模后5d布林佐胺组大鼠角膜水肿、混浊评分低于模型组（t=2.18，P<0.05），CNV面积小于模型组（t=6.58，P<0.01）。角膜组织病理学检查显示，布林佐胺组大鼠较模型组大鼠CNV及炎性细胞少。透射电子显微镜检查显示，模型组大鼠CNV旺盛，布林佐胺组大鼠角膜较模型组大鼠角膜血管腔少见。免疫组织化学检测表明，正常对照组大鼠角膜组织中可见AQP1和VEGF呈弱表达；模型组及布林佐胺组大鼠角膜碱烧伤后角膜组织中AQP1灰度值分别为88.01±11.03和58.10±12.14，差异有统计学意义（t=9.99，P=0.00），2个组VEGF灰度值分别为84.92±9.49和78.18±11.41，差异有统计学意义（t=2.48，P=0.02）。结论布林佐胺滴眼液能抑制大鼠角膜碱烧伤后CNV形成过程中AQP1的高表达，从而间接影响VEGF的表达，抑制或延缓CNV的形成。
二、碳酸酐酶抑制剂对AQP1水通道和肿瘤转移的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、碳酸酐酶抑制剂对AQP1水通道和肿瘤转移的影响（论文提纲范文）
（1）新型AQP1抑制剂的结构优化及其抗肿瘤活性的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 主要英文缩略词表 |
| 一、引言 |
| 二、材料与方法 |
| 1.DAP-20类似物的合成所用材料与方法 |
| 1.1 实验仪器与试剂 |
| 1.2 合成路线与合成方法 |
| 2.目标化合物抗肿瘤活性测试所用材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 肿瘤细胞与缓冲液 |
| 2.3 实验方法 |
| 三、结果 |
| 1.DAP-20类似物的生成 |
| 2.目标化合物抗肿瘤活性测试结果 |
| 四、讨论与分析 |
| 五、结论 |
| 六、参考文献 |
| 文献综述 水通道蛋白1在肿瘤发展中的调控作用及其抑制剂的研究 |
| 2.参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（2）AQP1通过wnt/β-catenin通路促进FLS活化参与大鼠胶原性关节炎发病的机制研究及（Ac）5GP对RAFLS生物学行为的影响（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 AQP1 通过 wnt/β-catenin 通路促进 FLS 活化参与大鼠胶原性关节炎发病的机制研究 |
| 1 前言 |
| 2 实验材料 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 试剂 |
| 2.3 主要仪器 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 CIA大鼠模型的构建,分组和药物治疗 |
| 3.2 关节炎指数评分方法 |
| 3.3 踝关节损伤的病理学检查和评估 |
| 3.4 AQP1,β-Catenin和 Ki67 的免疫组织化学检测 |
| 3.5 大鼠FLS制备和实验分组 |
| 3.6 AQP1 siRNA转染 |
| 3.7 MTT法检测细胞增殖 |
| 3.8 免疫荧光检测增殖细胞核抗原(PCNA) |
| 3.9 Transwell实验 |
| 3.10 TOP/FOP Flash双荧光素酶实验 |
| 3.11 血清Col II抗体及炎症因子水平测定 |
| 3.12 TUNEL法检测滑膜细胞凋亡 |
| 3.13 Western blot实验 |
| 4 统计分析 |
| 5 结果 |
| 5.1 CIA大鼠模型的评价 |
| 5.2 滑膜组织中的AQP1 过表达加重大鼠CIA:参与β-Catenin信号激活 |
| 5.3 AQP1 siRNA转染降低了CIA FLS中的AQP1 蛋白水平 |
| 5.4 LiCl消除了AQP1 siRNA对 CIA FLS增殖的抑制作用 |
| 5.5 LiCl消除AQP1 siRNA对 CIA FLS迁移和侵袭的抑制作用 |
| 5.6 AQP1 si RNA抑制CIA FLS中 β-catenin信号通路的激活 |
| 5.7 AZ减轻了CIA大鼠关节炎的严重程度 |
| 5.8 AZ缓解了CIA大鼠踝关节的病理变化 |
| 5.9 AZ减轻了CIA大鼠踝关节的软骨损伤 |
| 5.10 AZ降低CIA大鼠血清Col II抗体、IL-1β和 TNF-α水平 |
| 5.11 AZ抑制CIA大鼠滑膜组织中Ki67 的表达 |
| 5.12 AZ促进CIA大鼠滑膜滑膜细胞凋亡 |
| 5.13 AZ调控CIA滑膜组织中Bcl-2、Bax和 caspase3 蛋白水平 |
| 5.14 AZ抑制CIA大鼠滑膜组织中Wnt/β-catenin通路的激活 |
| 6 讨论 |
| 7 结论 |
| 第二部分 (Ac)_5GP 通过抑制 Wnt /β-catenin 信号通路抑制类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的迁移,侵袭和炎症 |
| 1 前言 |
| 2 实验材料 |
| 3 试验方法 |
| 3.1 细胞培养与分组 |
| 3.2 MTT法检测细胞增殖 |
| 3.3 Transwell实验 |
| 3.4 划痕实验 |
| 3.5 ELISA实验 |
| 3.6 免疫荧光实验 |
| 3.7 western blot实验 |
| 4 统计分析 |
| 5 结果 |
| 5.1 (Ac)_5GP对 MH7A细胞活力的影响 |
| 5.2 (Ac)_5GP抑制TNF-α诱导的MH7A迁移和侵袭 |
| 5.3 (Ac)_5GP抑制TNF-α诱导的MH7A细胞骨架重组 |
| 5.4 (Ac)_5GP降低了TNF-α诱导的MH7A中促炎因子和MMPs的产生 |
| 5.5 (Ac)_5GP抑制TNF-α诱导MH7A中 Wnt/β-catenin通路的激活 |
| 5.6 XAV939对Wnt/β-catenin通路的抑制促进了(Ac)_5GP对TNF-α诱导的MH7A的治疗作用 |
| 6 讨论 |
| 7 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 综述 乙酰唑胺的药理作用及研究进展 |
| 参考文献 |
（3）乙酰唑胺通过降低水通道蛋白1抑制小鼠心脏早期心室重构（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写 |
| 引言 |
| 第一部分 AQP-1在小鼠心肌缺血再灌注损伤中的表达规律及作用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 AZA通过降低AQP1 转录与表达抑制小鼠心肌缺血再灌注损伤所致的早期心室重构 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 AQP-1在小鼠压力超负荷模型中的表达规律及作用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第四部分 AZA通过降低AQP1 转录与表达抑制小鼠压力超负荷引起的早期心室重构 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 AQP1与疾病 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）水通道蛋白1在肿瘤进展中的作用及其抑制剂研究进展（论文提纲范文）
| 1 AQP1的结构及功能 |
| 1.1 AQP1跨膜转运水分子 |
| 1.2 AQP1跨膜转运部分气体和阳离子 |
| 2 AQP1在肿瘤进展中的作用 |
| 2.1 细胞迁移 |
| 2.2 血管生成 |
| 2.3 肿瘤细胞增殖 |
| 2.4 下游信号通路 |
| 2.4.1 Wnt通路 |
| 2.4.2黏着斑激酶 (focal adhesion kinase, FAK) 及其下游 |
| 2.4.3 基质金属蛋白酶 (matrix metalloproteinases, MMP) 2/9 |
| 2.5 缺氧促进AQP1表达上调 |
| 3 AQP1的抑制剂 |
| 3.1 重金属及其化合物 |
| 3.2 四乙胺 (tetraethylammonium, TEA) |
| 3.3 乙酰唑胺 (acetazolamide, AZA) |
| 3.4 布美他尼 (bumetanide) 衍生物 |
| 3.5 假马齿苋皂苷 (bacopaside) |
| 3.6 其他小分子化合物 |
| 4 总结与展望 |
（5）AQP1抑制剂乙酰唑胺对佐剂性关节炎大鼠的治疗作用及其对IL-1β诱导大鼠关节软骨细胞凋亡的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 AQP1抑制剂乙酰唑胺对佐剂性关节炎大鼠的治疗作用及相关机制研究 |
| 1 前言 |
| 2 实验材料 |
| 2.1 试剂 |
| 2.2 主要仪器 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 大鼠AIA诱导和药物治疗 |
| 3.2 关节炎指数评分方法 |
| 3.3 ELISA试剂盒测量TNF-α和IL-1β血清水平 |
| 3.4 踝关节损伤的组织学检查与评价方法 |
| 3.5 RNA提取与实时定量聚合酶链式反应(QPCR) |
| 3.6 Western-blot法检测大鼠滑膜组织中相关蛋白的表达 |
| 3.6.1 滑膜组织及蛋白的提取 |
| 3.6.2 Western-blot法检测相关蛋白表达 |
| 4 统计分析 |
| 5 结果 |
| 5.1 AZ能够抑制AIA大鼠继发侧的炎症反应 |
| 5.2 AZ降低AIA大鼠TNF-α和IL-1β水平 |
| 5.3 AZ改善AIA大鼠踝关节的病理变化 |
| 5.4 AZ对AIA大鼠软骨组织蛋白多糖的合成有促进作用 |
| 5.5 AZ提高AIA大鼠软骨组织COII和蛋白聚糖mRNA水平 |
| 5.6 AZ降低AIA大鼠滑膜组织AQP1蛋白表达并抑制NF-κB信号通路的激活 |
| 6 讨论 |
| 第二部分 乙酰唑胺对IL-1β诱导大鼠关节软骨细胞凋亡的影响及可能机制研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 试剂与仪器 |
| 1.3 软骨细胞的分离培养与鉴定 |
| 1.4 MTT法检测细胞增殖 |
| 1.5 Hoechst33258染色观察细胞凋亡 |
| 1.6 AnnexinV-FITC/PI双染法检测各组软骨细胞凋亡率 |
| 1.7 Rhodamine-123染色观察细胞凋亡 |
| 1.8 Westernblot检测相关蛋白 |
| 1.9 免疫荧光法检测NF-κBp-65入核 |
| 1.10 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 软骨细胞的鉴定 |
| 2.2 AZ对IL-1β诱导的软骨细胞增殖的影响 |
| 2.3 Hoechst33258染色观察AZ抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡 |
| 2.4 AnnexinV-FITC/PI双染检测AZ抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋 |
| 2.5 Rhodamine-123染色检测AZ抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡 |
| 2.6 AZ对IL-1β诱导的软骨细胞中AQP1和凋亡相关基因蛋白表达的影响 |
| 2.7 AZ对IL-1β诱导的软骨细胞中NF-κB信号通路的影响 |
| 2.8 免疫荧光法检测AZ对NF-κBp65入核的影响 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（7）AQP1在人乳腺癌中的表达及功能研究（论文提纲范文）
| 个人简历 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 1. 乳腺癌的流行病学特征 |
| 2. 乳腺癌分子亚型和乳腺癌细胞株 |
| 3. 水通道蛋白 1 |
| 4. AQP1 与恶性肿瘤 |
| 5. 水通道蛋白 1 和乳腺癌 |
| 参考文献 |
| 第一部分 AQP1在人乳腺癌组织的表达及其与患者临床病理特征的关系 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 AQP1在人乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231、SK-BR-3及人正常乳腺上皮细胞MCF-10A中的表达情况 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 RNA干扰AQP1基因表达对MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第四部分 RNA干扰AQP1基因表达对MDA-MB-231细胞裸鼠移植瘤模型生长与转移的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 本研究创新之处 |
| 本研究存在的不足及展望 |
| 附录 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表论文 |
（8）AQP1在大鼠雪旺氏细胞及面神经水肿中表达调控机制的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 渗透压改变对雪旺氏细胞AQP1表达的影响及其表达调控的实验研究 |
| 实验一 低渗液对大鼠雪旺氏细胞生物学特性及AQP1表达变化的影响 |
| 一、材料与方法 |
| 二、统计学分析 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 实验二 渗透压改变对雪旺氏细胞MAPK信号通路的影响 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 实验三 MAPK在雪旺氏细胞水肿中对AQP1表达调控的实验研究 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 乙酰唑胺对大鼠雪旺氏细胞AQP1表达调控的初步研究 |
| 实验一 慢病毒介导的AQP1过表达对大鼠雪旺氏细胞生物学特性影响的实验研究 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 实验二 乙酰唑胺抑制AQP1表达与MAPK信号级联之间的机制研究 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、 讨论 |
| 实验三 乙酰唑胺对AQP1表达变化的穿梭机制研究 |
| 一、实验材料和方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 AQP1在面神经水肿中的表达调控及治疗机制的实验研究 |
| 实验一 大鼠面神经损伤模型的构建及评估 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 实验二 面神经损伤对大鼠面神经组织MAPK信号通路的影响 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 实验三 MAPK在面神经水肿中对AQP1表达调控的实验研究 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 全文小结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 在读期间发表论文 |
| 致谢 |
（9）RNA干扰抑制水通道蛋白3对肠粘膜上皮屏障影响的实验研究（论文提纲范文）
| 序言 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 附件 |
| 致谢 |
（10）碳酸酐酶抑制剂局部应用对大鼠角膜新生血管形成过程中水通道蛋白1表达的影响（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 角膜新生血管动物模型对比 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第二部分 碳酸酐酶抑制剂的局部应用 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 文献综述：水通道蛋白 1 与眼的关系 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 研究生在读期间发表的论文 |
四、碳酸酐酶抑制剂对AQP1水通道和肿瘤转移的影响（论文参考文献）
- [1]新型AQP1抑制剂的结构优化及其抗肿瘤活性的研究[D]. 高硕. 湖北医药学院, 2021(01)
- [2]AQP1通过wnt/β-catenin通路促进FLS活化参与大鼠胶原性关节炎发病的机制研究及（Ac）5GP对RAFLS生物学行为的影响[D]. 沐玉荣. 安徽医科大学, 2021(01)
- [3]乙酰唑胺通过降低水通道蛋白1抑制小鼠心脏早期心室重构[D]. 宋达. 河北医科大学, 2019(01)
- [4]水通道蛋白1在肿瘤进展中的作用及其抑制剂研究进展[J]. 张智昱,武娟,李学军. 药学学报, 2018(06)
- [5]AQP1抑制剂乙酰唑胺对佐剂性关节炎大鼠的治疗作用及其对IL-1β诱导大鼠关节软骨细胞凋亡的影响[D]. 陈伟娜. 安徽医科大学, 2018(12)
- [6]AQP1蛋白与碳酸酐酶抑制剂的相互作用及药物研究[A]. 李学军. 2017年中国药学大会暨第十七届中国药师周资料汇编, 2017
- [7]AQP1在人乳腺癌中的表达及功能研究[D]. 姬逸男. 广西医科大学, 2017(12)
- [8]AQP1在大鼠雪旺氏细胞及面神经水肿中表达调控机制的实验研究[D]. 胡皓. 第二军医大学, 2017(02)
- [9]RNA干扰抑制水通道蛋白3对肠粘膜上皮屏障影响的实验研究[D]. 张文杰. 南京医科大学, 2012(02)
- [10]碳酸酐酶抑制剂局部应用对大鼠角膜新生血管形成过程中水通道蛋白1表达的影响[D]. 张洁. 重庆医科大学, 2012(01)