一、“中国疫苗株鸡痘病毒载体和高效表达马立克氏病病毒gB基因的重组鸡痘病毒”课题通过专家鉴定（论文文献综述）
谢青梅,封柯宇,沈勇[1]（2019）在《动物病毒重组活载体疫苗研究进展》文中提出病毒活载体疫苗作为一种新型疫苗,与传统疫苗相比,具有极大的优势与应用前景,是当今与未来疫苗研制与开发的重要方向之一。目前在人类医学和兽医领域,病毒活载体疫苗均取得了大量的研究成果。本文综述了主要的兽用病毒疫苗载体及重组活载体疫苗的最新研究进展,并分析了其发展趋势,为进一步研制新型重组病毒疫苗提供参考。
娄亚坤[2]（2014）在《共表达H5亚型禽流感病毒HA基因和鸡IL-6基因重组鸡痘病毒的生物安全评价》文中研究说明禽流感病毒（Avian influenza virus, AIV）已成为危害养殖业、公共卫生的重要病原之灭活疫苗虽然在禽流感的防控中起到重要作用,但存在仅能诱导体液免疫、成本高等缺点。因此,研究者们正着力研制新型的基因上程疫苗。以鸡痘病毒为载体表达外源抗原蛋白的重组疫苗研究已十分成熟。目前对重组鸡痘病毒疫苗的免疫原性研究较多,对其生物安全评价较少,同时,重组活载体疫苗的生物安全评价是疫苗能否应用到临床上关键因素。本实验室构建的共表达H5亚型禽流感病毒HA基因和鸡IL-6基因重组鸡痘病毒（Recombinant fowlpox virus,rFPV-HAIL6）在鸭体内的免疫原性已经得到验证,因此,有必要开展重组鸡痘病毒在水禽体内的生物安全评价。1重组鸡痘病毒的理化特性与生物学特性研究rFPV与母本野生鸡痘病毒（Fowlpox virus, FPV）疫苗株分别在不同温度、pH、氯仿、胰酶等作用条件下研究rFPV的理化特性；rFPV与FPV等量感染单层CEF,连续传代,计算各代次比例,来评价重组鸡痘病毒与母本病毒的竞争性。试验结果表明,rFPV与FPV均对胰酶和氯仿敏感,在pH3-9的范围内具有一定的耐受性,对高温敏感。与野生株共传代,其复制竞争能力弱,因此,rFPV比野生鸡痘病毒疫苗株具有更高的生物安全性。2重组鸡痘病毒免疫麻鸭的生物安全性评价10日龄商品麻鸭随机分成6组,每组40只,颈部皮下分别免疫rFPV-HAIL6105PFU/只（0.2mL）,rFPV-HAIL6106PFU/只，rFPV-HA105PFU/只,FPV105PFU/只,高致病性H5N1亚型禽流感油乳剂灭活苗0.2mL/只,PBS0.2mL作为阴性对照,其中rFPV与FPV免疫组各有5只同居感染的麻鸭。在免疫后第1、7、14d采集麻鸭试验各组麻鸭外周血测定其血液理化指标变化情况,在免疫的1、3、7d同时随机扑杀3只做病毒体内分布试验及组织病理学观察；在免疫后21d每隔1w称量实验各组的麻鸭体重分析rFPV对麻鸭增重影响；在免疫后21d测定同居感染试验麻鸭体内针对FPV的ELISA抗体水平,评价rFPV的同居感染能力；在免疫后的1、3、7、14d采集实验各组的饲料、粪便、饮水、喉头及泄殖腔棉拭子分离病毒,评价rFPV的水平传播能力；在免疫后60d采集rFPV-HAIL6试验组免疫部位肌肉通过southern blot的方法评价重组痘病毒外源基因整合麻鸭染色体DNA的可能性；在动物试验期间每隔1w采集试验各组麻鸭外周血通过HI或者ELISA的方法测定HA抗体和FPV抗体水平,评价rFPV所诱导的抗体水平消长；rFPV以105PFU接种10日龄麻鸭,在接种后4d采集接种部位肌肉,研磨,取研磨液接种10日龄麻鸭,如此盲传5代次,取每代次的接种部位研磨液接种CEF分离病毒。试验结果显示,重组鸡痘病毒对麻鸭的血液理化个别指标有影响,2w后恢复至正常水平；组织病理学观察未发现明显病变；对麻鸭增重无影响；体内分布试验显示在麻鸭体内除接种部位外其他组织脏器分离不到病毒,PCR可以检测各个组织病毒核酸,免疫组化结果可以检测到rFPV在各组脏器表达的外源蛋白；同居接触不会水平传播；未从饲料、粪便、饮水及棉拭子中分离到病毒不会污染周围环境,对周围环境安全；Southern blot试验表明,外源基因不会整合到麻鸭染色体DNA中；鸭体内盲传,只能从第一代次麻鸭体内分离到病毒,表明病毒不能连续在鸭体内传播,不会发生毒力返强。3重组鸡痘病毒免疫鹅的安全性评价重组鸡痘病毒以106PFU免疫10日龄小鹅,同时设置PBS组作为阴性对照。在免疫后不同时间,通过血液的理化指标和组织病理学观察,来评价重组鸡痘病毒对鹅的安全性。试验结果表明,试验组鹅的各项理化指标在免疫2w后恢复正常,各组织脏器微观病理学观察,未发现明显病理变化。综上所述,重组鸡痘病毒对小鹅也显示出良好的安全性。
朱战波[3]（2012）在《表达NDV、IBDV及FMDV基因的重组FPV载体活疫苗构建和实验免疫研究》文中进行了进一步梳理新城疫（ND）是由新城疫病毒（NDV）引起的一种禽类动物的烈性传染病之一，给养禽业带来了巨大的经济损失。疫苗接种是特异性预防和控制ND的可靠和有效的手段。鸡传染性法氏囊病（Infectious Bursal Disease，IBD）又称甘波罗病，是由呼肠弧病毒引起的一种急性、高度传染性疾病。由于该病发病突然、病程短、死亡率高，且可引起鸡体免疫抑制，是危害当前养禽业的重要传染病。近年来，各地出现超强毒株（vvIBDV）及变异株，并能突破母源抗体的保护，给IBD的防制带来了巨大的困难。这两种病毒病常规灭活苗免疫原性低，弱毒疫苗存在易散毒、毒力返强等缺陷，因此，研究新型疫苗已经成为当前的热点。口蹄疫（Foot-and-Mouth disease，FMD）是由口蹄疫病毒（Foot-and-Mouthdisease virus，FMDV）引起偶蹄动物感染的烈性传染病之一。目前FMD呈世界范围流行趋势，其血清型有O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3和Asia1型共7种。O型、Asia1型等FMD在我国周边国家或东南亚地区时有发生，对我国养殖业构成了严重的威胁。使用重组鸡痘病毒诱导鸡和哺乳动物细胞免疫应答抵抗外来抗原已经取得明显进步，鸡痘病毒的主要优势在于它允许插入较大量的外源基因。需要我们明确的是对于任何一种病毒表达哪些基因用作多价抗原。使用天然的鸡痘病毒启动子可能优化外源抗原的表达。也要对重组鸡痘病毒表达抗原（外源抗原或鸡痘病毒抗原）之间的竞争进行更多的认识，从而帮助构建有效预防多种病原体的多价重组体鸡痘病毒。联合免疫的深入研究有助于帮助我们认识进而选择不同疫苗形式（包括DNA、蛋白和传统的疫苗）的最佳组合。本实验以合成的痘病毒早晚期启动子PE/L及P7.5作为串联启动子的具有自主产权的鸡痘病毒转移载体为基础，选择NDV的F、HN基因，IBDV的VP0（VP243）、VP2基因，分别置于双向启动子下游，构建了双向表达的鸡痘病毒转移载体pMTB18-F-F、pMTB18-F-HN、pMTB18-F-VP0、pMTB18-VP0-VP2、pUTAL-F-VP2。应用脂质体转染法，将该重组鸡痘病毒中间转移载体与282E4株鸡痘病毒共转染鸡胚成纤维细胞（CEF），经BrdU连续三次加压筛选，挑斑纯化后传代，对鸡痘病毒重组体在体外分别以PCR、RT-PCR和IFA对外源基因的重组、转录和蛋白表达及其生物学活性进行了鉴定。PCR检测结果表明转移载体构建均正确，同时在转录水平上进一步证实了重组病毒可以稳定携带外源基因并正确转录。将重组鸡痘病毒rFPV-F-VP0、rFPV-F-F、rFPV-F-HN、rFPV-F-VP2以抗NDV血清作为一抗，rFPV-F-VP0、rFPV-VP0-VP2、rFPV-F-VP2以抗IBDV血清作为一抗分别进行间接免疫荧光和免疫酶检测，分别检测到了特异性荧光和褐色的痘斑。研究证明获得了5株重组鸡痘病毒rFPV，能够有效的表达外源蛋白，表达产物具有相应的生物学活性。以SPF鸡作为动物模型，对之前构建的5株重组鸡痘疫苗进行了免疫研究，通过体液与细胞免疫指标检测，对疫苗的免疫原性进行了评估。结果显示，所构建的重组鸡痘病毒rFPV均能刺激SPF鸡产生抗NDV或IBDV的特异性ELISA抗体，疫苗接种后第2周抗体水平开始逐渐提高，在第5-6周达到高峰，其抗体水平均高于对照组。对脾T淋巴细胞的增殖能力和血清中Th1类细胞因子（IFN-γ和IL-2）、Th2类细胞因子（IL-4和IL-10）进行了检测。研究表明，重组鸡痘疫苗使SPF鸡产生了特异性体液和细胞免疫应答。攻毒试验结果显示，用重组鸡痘病毒rFPV-F-HN能在一定程度上抵抗新城疫强毒的攻击；重组鸡痘病毒rFPV-F-VP2、rFPV-VP0-VP2免疫的SPF鸡能够明显降低分离株IBDV-JL01/2007对法氏囊组织的损伤程度。本实验室先后成功构建并筛选出FMDV vUTAL3CP1（O型）、vUTAL-P1-2A-3C-IL18（Asia1型）、 vUTA2-P1-2A-3C （Asia1型）、vUTA2-P1-2A-IL18（O型）重组鸡痘病毒疫苗， FMDVGS115/pPIC9K-VP1-2A-CTE（O型）、GS115/pPIC9K-VP1-2A-CTE（Asia1型）酵母重组表达蛋白，pVIRIL18P1（O型）和pVAXI-P1-2A-3C（Asia1型）核酸疫苗。上述疫苗经小鼠单独免疫试验，表明均具有良好的免疫原性，可以激发针对FMDV的特异性体液和细胞免疫应答。据此，本研究利用上述疫苗，采用prime-boost策略免疫FMDV敏感动物豚鼠，并对其诱导的特异性体液和细胞免疫水平进行了检测，以此确定最佳疫苗和免疫策略。结果显示，O型疫苗中，核酸苗pVIRIL18P1首免，重组鸡痘病毒疫苗加强免疫的体液和细胞效果最好，Asia1型以重组鸡痘苗vUTA2-P1-2A-3C-IL18细胞免疫效果突出。研究表明，在针对目标抗原的初次免疫反应中DNA免疫是最有效的，重组痘病毒可加强免疫。同时能依靠能痘病毒自身佐剂的活性增强免疫反应。以猪为动物模型，应用prime-boost策略，评价了O型苗pVIRIL18P1/vUTAL3CP1、 vUTAL3CP1/vUTAL3CP1， Asia1型苗pVAXI-P12A3C/vUTA2-P12A3CIL18、vUTA2-P12A3CIL18/vUTA2-P12A3CIL18几种联合免疫方案的特异性体液和细胞免疫应答水平。核酸苗（500μg/头）采用壳聚糖包裹，鸡痘苗（107PFU）加入佐剂QS-21后与冻干保护剂混合。对35日龄仔猪间隔28d进行两次免疫，应用O型和Asia1型口蹄疫间接ELISA、LPB-ELISA、VP1结构蛋白抗体ELISA（O型）、ELISPOT、T淋巴细胞增殖试验、细胞因子检测等试验方法，证实了候选DNA和鸡痘重组疫苗均能诱导特异性的免疫应答。核酸苗首免，重组鸡痘病毒疫苗加强免疫的体液和细胞效果最优。总之，本研究以新的载体构建和联合免疫研究思路，探讨了重组鸡痘病毒在鸡新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、口蹄疫病毒新型疫苗的设计和免疫策略，对基于双向启动子的重组核酸疫苗构建与实验免疫进行了深入研究，为有效禽类和哺乳动物重组疫苗的研制与临床前实验研究奠定了基础。
甘军纪[4]（2010）在《表达鸡新城疫病毒HN基因重组鸡痘病毒活疫苗的临床前研究》文中认为鸡新城疫（ND）是由新城疫病毒（NDV）引起的家禽最严重的传染病之一。NDV的病毒囊膜含有2个主要的糖蛋白,即融合蛋白（F）和血凝素-神经氨酸酶蛋白（HN）,它们都被用于重组鸡痘病毒疫苗的研究。本研究从我们实验室已构建的单表达、共表达新城疫病毒（NDV）融合蛋白（F）和血凝素-神经氨酸酶蛋白（HN）基因的重组鸡痘病毒中筛选一个作为疫苗候选株,进一步完善实验室试验,并在GMP条件下完成中间试制,为新城疫重组鸡痘病毒活疫苗顺利进入临床试验打好了基础。1.单表达和共表达NDV F和HN基因重组鸡痘病毒活疫苗的免疫效力比较试验为评价母源抗体对抗新城疫（ND）重组鸡痘病毒（rFPV）活疫苗免疫效力的影响,本研究用单表达、共表达NDV基因Ⅶ型病毒ZJ1株F、HN基因的rFPV活疫苗rFPV-12LSF、rFPV-12LSHN、rFPV-12LSFHN和油乳剂灭活疫苗分别免疫14日龄商品蛋鸡,重组鸡痘病毒疫苗的免疫剂量均为2×104PFU,免疫后21d分别用106ELD50NDV不同强毒株攻毒。其中F48E8株攻毒的免疫保护率分别为30.3%、73.2%、41.1%、89.3%；而ZJ1株攻毒的免疫保护率分别为35.8%、67.9%、78.6%、100%。用表达鸡IL-2基因的重组鸡痘病毒rFPV-12LSIL-2与rFPV-12LSHN联合免疫没有提高rFPV-12LSHN疫苗的免疫保护力。试验结果表明,单表达NDV HN基因的重组鸡痘病毒rFPV-12LSHN可作为ND活疫苗候选株,为ND重组鸡痘病毒活疫苗的进一步应用性开发奠定了基础。2.表达新城疫病毒HN基因的重组鸡痘病毒的部分生物学特性研究为了评价转基因对鸡痘病毒（FPV）生物学特性的影响,通过电镜观察重组鸡痘病毒（rFPV）感染的鸡胚成纤维细胞（CEF）,结果表明在FPV中插入NDV血凝素-神经氨酸酶蛋白（HN）基因（rFPV-12LSHN）后,不改变rFPV的形态、病毒成熟过程。rFPV-12LSHN与FPV在CEF上的产量无显着差异。rFPV-12LSHN接种11日龄鸡胚,在尿囊膜（CAM）上观察到典型痘斑或水肿,鸡胚最小感染量≤100PFU。免疫荧光试验证明,rFPV-12LSHN在CEF上传代能稳定表达NDV HN抗原。rFPV （103PFU/羽）接种SPF鸡快速诱导NDV HI抗体应答,免疫3周后完全保护NDV强毒攻击。3.表达新城疫HN基因的重组鸡痘病毒活疫苗的免疫持续期和加强免疫研究为了评价表达新城疫病毒（NDV）血凝素-神经氨酸酶（HN）基因的重组鸡痘病毒（rFPV-12LSHN）活疫苗的免疫持续期和加强免疫对疫苗免疫效力的影响。用rFPV-12LSHN活疫苗免疫14日龄SPF鸡,103PFU/羽,7d即可检测到NDV HI抗体应答,对NDV强毒F48E8株攻毒保护率达100%。一次免疫18周后,对NDV强毒攻击依然提供完全保护。鸡痘病毒（FPV）疫苗免疫4周,再接种rFPV-12LSHN活疫苗,攻毒保护率降低至50%。相反,rFPV-12LSHN免疫4周,随后二次免疫可显着提高对NDV的体液免疫应答水平（P<0.01）,对NDV强毒攻击的保护率没有影响。结果表明,表达NDV HN基因的重组鸡痘病毒（rFPV-12LSHN）活疫苗,能够快速建立坚强免疫力,免疫持续期至少可达18周,rFPV-12LSHN勺二次免疫可以提高疫苗的免疫力。4.重组鸡痘病毒活疫苗X-gal染色空斑计数法的建立建立了一种简易的携带LacZ基因重组鸡痘病毒（rFPV）活疫苗的X-gal染色空斑计数法。rFPV接种次代鸡胚成纤维细胞（CEF）72h后,加2mL/L戊二醛固定液室温固定15min,再加500ug/mL X-gal染色液37℃过夜,倒置显微镜下直接计数蓝染空斑。染色空斑计数法的空斑数是不染色直接计数法的1.6-3.3倍。该方法在重组鸡痘病毒活疫苗研究及其工业化生产检验中具有较大的应用价值。5.鸡新城疫重组鸡痘病毒活疫苗的中试生产为了给临床试验提供疫苗,在GMP条件下进行了鸡新城疫重组鸡痘病毒活疫苗（rFPV-ND-HN）的中试生产。CEF作为制苗材料,培养于10000ml转瓶,按0.2PFU/细胞接种毒种rFPV-12LSHN,37℃12转/h旋转培养,待细胞病变达到80%,收获感染细胞,加适量的5%蔗糖-脱脂奶粉,随后冻干。共生产了5批rFPV-ND-HN冻干疫苗,质量指标全部达到标准要求。总结1.筛选出单表达NDV HN基因的重组鸡痘病毒（rFPV-12LSHN）作为疫苗候选株。2. rFPV-12LSHN与亲本毒株FPV-LP在CEF细胞内的病毒形态、繁殖方式以及病毒产量没有明显变化。3. rFPV-12LSHN活疫苗,能够快速建立坚强免疫力,免疫持续期至少可达18周。4. rFPV-12LSHN勺二次免疫可以显着提高疫苗的NDV HI抗体应答。5.建立了一种简易、快速、敏感的重组鸡痘病毒活疫苗的X-gal染色空斑计数方法。6.在GMP条件下中试生产了5批rFPV-ND-HN疫苗。
胡文玮[5]（2008）在《表达禽流感病毒HA、NA基因和传染性喉气管炎病毒gB基因重组鸡痘病毒的构建》文中研究表明鸡痘病毒（Fowlpox virus，FPV）是重要的动物病毒表达载体，在疾病的控制中起到了重要的作用，以鸡痘病毒为载体已经研制出许多种重组病毒疫苗，其中有的已经商业化。构建表达多个病原体基因的重组鸡痘载体疫苗对于面临多种疾病威胁的养禽业来说尤其具有重要的意义。禽流感（Avian influenza，AI）、传染性喉气管炎（Infectious laryngotracheitis，ILT）和鸡痘（Fowlpox）是均能引起感染禽呼吸道疾病，给养禽业造成了严重的经济损失。目前传统方法制备的疫苗对防制这些疾病起到了有效的作用。但常规疫苗的使用存在一些难以克服的缺陷，如影响疫情监测、生产成本高等，需要能够区分野毒感染的、生产成本高的新型疫苗来替代常规疫苗。本试验分别将H9N2亚型禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）的HA和NA基因、传染性喉气管炎病毒（Infectious laryngotracheitis virus，ILTV）的gB基因插入到鸡痘病毒转移载体早晚期启动子LP2EP2之下，构建同时含有HA、NA和gB基因以及报告基因LacZ（晚期启动子P11控制之下）鸡痘病毒转移载体。利用脂质体转染技术将转移载体导入到事先感染鸡痘病毒的鸡胚成纤维细胞中，经过6轮蓝斑纯化获得了包含了AIV的HA和NA基因、ILTV的gB基因以及报告基因LacZ的重组鸡痘病毒，称为rFPV-HA/NA/gB。PCR检测证明，rFPV-HA/NA/gB基因组中含有完整的AIV的HA、NA基因和ILTV的gB基因；间接免疫荧光试验和Western-blot试验证明，AIV的HA、NA蛋白和ILTV的gB蛋白在rFPV-HA/NA/gB感染的CEF细胞中均能获得表达。
杨明凡[6]（2008）在《表达鸡传染性喉气管炎病毒gD基因与鸡IL-2基因重组禽痘病毒的构建及其免疫效力研究》文中进行了进一步梳理鸡传染性喉气管炎（Infectious laryngotracheitis,ILT）是由传染性喉气管炎病毒（Infectious laryngotracheitis virus,ILTV）引起的鸡的一种急性上呼吸道传染病,本病给养鸡业造成较大的经济损失。目前主要应用致弱的喉气管炎病毒作为弱毒疫苗,但是由于鸡传染性喉气管炎弱毒疫苗株也能引起潜伏感染,并在鸡群与鸡群之间传播过程中毒力会返强,从而成为新的感染源,因此,研究新型安全且有效的疫苗用于ILT的防制十分必要。本文将ILTV河南长葛株的gD基因与鸡IL-2基因重组禽痘病毒转移载体,得到一株重组病毒。试验研究主要从以下几个方面展开:1.ILTV河南长葛株分离鉴定及其gB、gC和gD基因的克隆与序列分析鸡胚尿囊膜接种和琼脂扩散试验对分离病毒进行鉴定,结果表明所分离病毒为ILTV,从而获得一株ILTV河南长葛株。并分别克隆其gB、gC和gD基因,测定其核苷酸序列,将其核苷酸与GenBank公布的ILTV相应序列进行分析和同源性比较,结果长葛分离株ILTV的gB、gC和gD基因3个序列分别与GenBank登录的ILTV gB、gC和gD基因序列存在很高的同源性,其同源性在99.7%～99.9%之间,说明ILTV的gB、gC和gD基因序列相对保守。2.ILTV长葛株gB、gC和gD基因真核表达载体的构建及其免疫效果研究将ILTV长葛株gB、gC和gD基因插入pcDNA3.1中,构建了真核表达载体pcDNA-gB、pcDNA-gC和pcDNA-gD。间接免疫荧光检测结果表明,三种重组质粒均能够在PK-15细胞中表达。以SPF鸡为试验动物,肌内注射构建的pcDNA-gB、pcDNA-gC、pcDNA-gD和pcDNA3.1空载体进行免疫接种。微量血清中和试验检测结果显示,构建的真核表达载体pcDNA-gB、pcDNA-gC、pcDNA-gD和活疫苗均能够诱导机体产生较高的抗体水平;MTT法检测表明构建的真核表达载体pcDNA-gB、pcDNA-gC、pcDNA-gD及活疫苗对照均能够诱导淋巴细胞增殖,同时也能够诱导强的CTL细胞的增殖。表明构建的载体pcDNA-gB、pcDNA-gC、pcDNA-gD和弱毒疫苗均能够有效诱导机体产生体液免疫和细胞免疫。3.ILTV长葛株gD基因的表达及间接ELISA检测方法的初步建立将ILTV gD基因插入到原核表达载体pET-28a（+）中,构建重组表达质粒pET28-gD。将pET28-gD转化到宿主表达菌BL21中,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE结果显示表达目的蛋白大小为55ku,Western-blotting表明表达产物具有良好的免疫原性。表达的蛋白产物经纯化后作为ELISA包被抗原,初步建立了间接ELISA诊断方法,并确定了抗原最佳包被浓度为24.5μg·mL;最佳血清稀释度为1∶320,初步确定ELISA判定标准为OD450≥0.25判为阳性,小于0.25为阴性。试验证明建立的间接ELISA具有很强的特异性和较高的敏感性且与多种病毒抗原无交叉反应。用初步建立的ELISA和微量血清中和试验检测临床送检的84份血清样品。结果两种方法的阳性符合率为96.5%（28/29）,阴性符合率为98.2%（55/56）,表明建立的方法可用于临床上ILT的检测。4.表达ILTV长葛株gD基因重组禽痘病毒的构建及其免疫效力试验将ILTV长葛株gD基因同源重组到禽痘病毒基因组中,得到能高效表达ILTV gD基因的重组禽痘病毒（rFPV-ILTV-gD）。将rFPV-ILTV-gD和ILT弱毒疫苗同时免疫试验鸡,同时设非免疫对照鸡群。血清中和抗体检测结果表明:疫苗组与重组病毒组差异不显着（p＞0.05）,而重组病毒组和疫苗组与空白对照组差异均显着（p＜0.05）。免疫42d攻毒试验表明,重组病毒组和疫苗组对ILTV强毒攻击的保护率均为96.67%,而空白对照组为6.67%。说明该重组病毒作为弱毒疫苗能够抵抗ILTV强毒的攻击,对免疫鸡群有较好的保护作用。5.ILTV河南长葛株gD基因与鸡IL-2串联重组禽痘病毒的构建及免疫效力试验将ILTV长葛株的gD基因与鸡IL-2串联到禽痘病毒表达载体中,转染后获得一株重组病毒rFPV-IL2-ILTV-gD,该重组病毒能够高效表达ILTV gD基因。将重组病毒rFPV-ILTV-gD、rFPV-IL2-ILTV-gD和ILT弱毒疫苗免疫试验动物;同时设空白对照。免疫后ELISA检测结果表明疫苗组与重组病毒rFPV-IL2-ILTV-gD组、重组病毒rFPV-IL2-ILTV-gD与重组病毒rFPV-ILTV-gD抗体效价相比差异不显着（p＞0.05）,而重组病毒组rFPV-IL2-ILTV-gD、重组病毒rFPV-ILTV-gD和疫苗组与空白对照组抗体效价相比,差异均显着（p＜0.05）。免疫28d攻毒后每组鸡的发病情况表明重组病毒rFPV-IL2-ILTV-gD组、重组病毒rFPV-ILTV-gD和疫苗组对ILTV强毒攻击的保护率分别为96%、92%和96%,而空白对照组为8%。说明构建的重组病毒rFPV-IL2-ILTV-gD与商品弱毒疫苗的免疫效力相当,能够较好的保护免疫鸡群。
张浩[7]（2008）在《猪瘟病毒E0-E2基因重组鸡痘病毒遗传稳定性和免疫剂量研究》文中提出猪瘟（Classical swine fever,CSF）是由猪瘟病毒（CSFV）引起的猪和野猪的一种高度致死性、接触性传染病,是严重威胁全球养猪业的疫病之一。猪瘟疫苗的免疫接种是预防猪瘟的一种有效手段。本文对猪瘟候选疫苗CSFV E0-E2基因重组鸡痘病毒活载体疫苗的毒种遗传稳定性和疫苗免疫剂量进行了研究,获得了以下结果。1.将重组鸡痘病毒rFPV-E0-E2在鸡胚成纤维细胞上连续传了20代,取第5、10、15和20代重组病毒,分别用蓝斑试验、PCR扩增和基因序列分析以及间接免疫荧光试验研究了重组病毒的遗传稳定性。结果各代次的重组病毒产生的蚀斑均为蓝色,从各代重组病毒DNA中均扩增出了E0和E2基因,基因序列分析发现仅第20代重组病毒插入基因发生2个点突变,即E0基因139A→G,E2基因413A→G。间接免疫荧光也能够检测到目的蛋白的表达。结果表明重组鸡痘病毒rFPV-E0-E2在鸡胚成纤维细胞上传20代以内具有良好的遗传稳定性,插入的CSFV E0-E2基因能够正确稳定表达。2.用CEF细胞扩增了3批重组鸡痘病毒rFPV-E0-E2,并对其进行了纯度、病毒含量、特异蛋白的表达的检测和无菌检验。结果表明,3批重组病毒rFPV-E0-E2具有较高纯度,无细菌和霉菌污染,其TCID50分别为10-7.5/0.025 mL、10-9/0.025 mL和10-9/0.025 mL,并且均能够正常表达CSFV E0-E2基因,拟作为疫苗的原始毒种种子批使用。同时,实验室生产并检验了1批猪瘟病毒E0-E2基因重组鸡痘病毒活载体疫苗毒,测得CSFVShimen株对50～60日龄的猪瘟易感猪的LD50为10-2.8/2mL,为进行猪瘟病毒E0-E2基因重组鸡痘病毒免疫剂量试验提供了材料和依据。3.使用变量免疫定量攻毒方法进行了CSFV基因重组鸡痘病毒的免疫剂量试验。将23头猪随机分成6组,分别以不同程序免疫不同剂量的重组鸡痘病毒。免疫后28d,每头猪经颈部肌肉注射100 LD50的Shimen株CSFV,继续观察21 d,评价疫苗免疫保护效果。结果以1.04×107pfu的CSFV基因重组鸡痘病毒rFPV-E0-E2接种两次的猪受到100LD50的CSFVShimen株肌肉注射攻击时,能够获得50%的临床保护,即该疫苗对CSFV攻毒临床症状的PD50为2×1.04×107pfu。该结果为确定疫苗免疫剂量提供了依据。
金明兰[8]（2007）在《口蹄疫病毒基因重组鸡痘病毒活载体疫苗系统鉴定研究》文中研究说明本研究以共表达FMDV衣壳蛋白前体P1-2A和蛋白酶3C基因的重组鸡痘病毒vUTAL3CP1为研究对象,较系统地进行遗传稳定性、理化学特性、生物学特性、病毒毒种系统鉴定等方面的研究,探索实验室的疫苗制备工艺;将重组鸡痘活载体疫苗分别接种小鼠、豚鼠、猪、牛,以及妊娠小鼠、豚鼠、猪、牛及其新生子代动物,利用临床观察、病理组织学、PCR、RT-PCR、ELISA、IFA、中和抗体检测、免疫组织化学等方法检测其病毒在体内的分布、病毒基因的残留、抗体消长规律、细胞毒性、组织毒性、生态环境影响;将接种动物与非接种动物同居,通过抗体水平和病毒基因检测,证明重组鸡痘活载体疫苗不会造成同居感染,接种动物不会造成垂直感染。通过临床观察、病理组织学检测等方法证明该疫苗在接种动物体内有无毒性;利用PCR、RT-PCR方法检测在免疫动物体内残留时间短,正常剂量和超大剂量对妊娠动物和子代动物无安全威胁,对生态环境无影响,从而进一步证明所构建的重组鸡痘病毒活载体疫苗的生物安全性。
卢军,胡传伟,金乔,彭大新,刘文博,高崧,张如宽,刘秀梵[9]（2007）在《表达鸡马立克氏病病毒gB基因重组鸡痘病毒的遗传稳定性及生物安全性评价》文中研究表明为了评价表达鸡马立克氏病病毒gB基因重组鸡痘病毒（rFPV-gB/R）的遗传稳定性,我们将纯化后的重组病毒在CEF单层上连续传30代,引起细胞病变的速度和形态均未发生明显变化;覆盖含X-Gal的琼脂引起的空斑均为蓝色;间接免疫荧光实验证明rFPV-gB/R中的gB基因始终能稳定表达;序列测定结果表明,重组病毒在细胞上连续传30代、在SPF鸡上连续传5代后,gB基因序列没有发生任何变化;以0、10、20、30代重组病毒制成冻干疫苗进行的实验室免疫效力实验表明,细胞连续传代后rFPV-gB/R仍然保持了原有的免疫原性。可见重组鸡痘病毒gB基因的结构和免疫原性都是高度稳定的。为了评价rFPV-gB/R的生物安全性,我们将rFPV-gB/R通过SPF鸡连续传5代,检测病毒在鸡体的存在部位及其消长、生长繁殖性能和毒力变化;将rFPV-gB/R免疫鸡与未免疫鸡同笼饲养,攻击FPV-102E6强毒,以检测rFPV-gB/R感染鸡的接触传染性。结果显示,rFPV-gB/R在鸡体的存在时间大约为7d,在体内仅存在于接种部位;鸡体传代后痘病毒毒力有一定程度下降,gB基因核苷酸序列未发生任何变化;同居未免疫SPF鸡在痘病毒强毒攻击后全部发痘,可见重组病毒免疫鸡没有接触传染性,能在鸡体内稳定地传代,rFPV-gB/R具有高度的生物安全性。
高月花[10]（2006）在《利用Cre-loxP自动敲除AIV H5 HA重组鸡痘病毒中的报告基因》文中认为在重组毒构建过程中,为了便于筛选和纯化,常常需要绿色荧光蛋白、LacZ等筛选标记,构建好的重组病毒基因组中含有这些报告基因,不符合商业疫苗生物安全的要求和基因工程疫苗的种毒标准。因此,将重组体中的报告基因去除是非常重要的内容。本研究利用Cre-loxp系统去除了重组毒的报告基因,最终获得了只含表达禽流感病毒（AIV ）H5亚型血凝素（HA）基因的重组鸡痘病毒,并对其进行了初步的免疫效力测定。主要研究内容如下:1.禽痘病毒通用转移载体的构建以禽痘病毒（FPV）282E4株基因组DNA为模板,PCR扩增了2.35kb大小的禽痘病毒F30序列作为同源重组臂。将含痘病毒早晚期启动子的绿色荧光蛋白基因插入F30序列基因构建转移载体,通过首次转染、筛选,获得了表达GFP的重组禽痘病毒。二次转染过程中通过Cre重组酶,去除了重组病毒基因组的GFP基因,达到了去除报告基因的目的。实验结果表明,以GFP作为筛选标记使重组病毒的纯化更为简便,同时利用Cre-loxP系统可以轻松地去除报告基因,为目的基因重组禽痘病毒的构建创造条件。2.表达禽流感病毒H5血凝素重组禽痘病毒的构建以含HA基因pH308为模板,通过PCR扩增了H5亚型禽流感病毒HA基因,构建含禽痘病毒复合启动子、SV40 PolyA的H5 HA基因表达盒。将H5血凝素基因和GFP基因表达盒克隆入禽痘病毒F30基因构建了转移质粒载体pPH5,将转移质粒载体与脂质体混合转染已感染FPV 282E4株的CEF细胞,利用免疫荧光初次筛选了表达H5和GFP的禽痘病毒重组体。通过二次转染,利用Cre-Loxp系统自动敲除重组病毒中的GFP基因,最终获得了只含H5血凝素基因表达盒的重组禽痘病毒。免疫荧光和病毒复制效率测定结果表明,经过6次传代后重组病毒仍然稳定复制并表达H5血凝素。3.表达H5亚型HA基因的重组鸡痘病毒的免疫效力测定
二、“中国疫苗株鸡痘病毒载体和高效表达马立克氏病病毒gB基因的重组鸡痘病毒”课题通过专家鉴定（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、“中国疫苗株鸡痘病毒载体和高效表达马立克氏病病毒gB基因的重组鸡痘病毒”课题通过专家鉴定（论文提纲范文）
（1）动物病毒重组活载体疫苗研究进展（论文提纲范文）
| 1 痘病毒活载体疫苗 |
| 2 疱疹病毒活载体疫苗 |
| 3 腺病毒活载体疫苗 |
| 4 新城疫病毒活载体疫苗 |
| 5 其他动物病毒载体疫苗 |
| 6 展望 |
（2）共表达H5亚型禽流感病毒HA基因和鸡IL-6基因重组鸡痘病毒的生物安全评价（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 综述 |
| 第一章 共表达H5亚型禽流感病毒HA基因和鸡IL-6基因的重组鸡痘病毒的理化特性与生物学特性研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第二章 共表达H5亚型禽流感病毒HA基因和鸡IL-6基因的重组鸡痘病毒免疫麻鸭的生物安全性评价 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 第三章 共表达H5亚型AIV HA基因和鸡IL-6基因的重组鸡痘病毒免疫鹅的安全性评价 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 致谢 |
（3）表达NDV、IBDV及FMDV基因的重组FPV载体活疫苗构建和实验免疫研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 绪论 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第1章 鸡痘病毒载体的研究进展 |
| 1 痘病毒家族 |
| 2 痘病毒的分类 |
| 3 鸡痘病毒的趋向性和免疫逃避策略 |
| 4 禽痘病毒抑制细胞凋亡 |
| 5 FPV 编码的受体对宿主蛋白的特异性 |
| 6 痘病毒作为理想疫苗设计的候选载体 |
| 7 强化先天性免疫调节疫苗反应 |
| 第2章 家禽重组禽痘病毒疫苗的研究进展 |
| 1 禽痘病毒重组体的构建 |
| 2 重组 FPV 疫苗 |
| 3 FPV 重组体疫苗对母源抗体的影响 |
| 4 非禽类疫苗 |
| 第3章 哺乳动物禽痘病毒载体疫苗研究进展 |
| 1 FWPV 毒株 |
| 2 哺乳动物 FWPV 疫苗接种的历史：狂犬病和麻疹 |
| 3 重组体鸡痘病毒用作哺乳动物疫苗的发展 |
| 4 宿主免疫调节因子的共表达 |
| 5 涉及鸡痘病毒的联合免疫方案 |
| 6 现存鸡痘病毒免疫效率的提高 |
| 7 临床试验 |
| 8 结语 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第1章 表达 NDV、IBDV 基因重组鸡痘病毒载体活疫苗的构建和筛选 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第2章 表达 NDV、IBDV 基因的重组鸡痘病毒载体活疫苗对 SPF鸡的实验免疫研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第3章 口蹄疫重组鸡痘载体活疫苗在豚鼠体中的免疫原性研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第4章 口蹄疫核酸苗和重组鸡痘病毒活疫苗的猪体实验免疫研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 导师及作者简介 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及取得的科研成果 |
| 致谢 |
（4）表达鸡新城疫病毒HN基因重组鸡痘病毒活疫苗的临床前研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 第一章 单表达和共表达NDV F和HN基因重组鸡痘病毒活疫苗的免疫效力比较试验 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二章 表达NDV HN基因的重组鸡痘病毒的 #10部分生物学特性研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 鸡新城疫重组鸡痘病毒活疫苗的免疫持续期和加强免疫研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四章 重组鸡痘病毒活疫苗X-GAL染色空斑计数法的建立 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第五章 鸡新城疫重组鸡痘病毒活疫苗的中试生产 |
| 一.材料与方法 |
| 1 毒种与SPF种蛋 |
| 2 生化、化学试剂 |
| 3 疫苗制造及半成品检验 |
| 4 成品检验 |
| 二.结果 |
| 三.小结 |
| 参考文献 |
| 全文总结和创新点 |
| 综述 重组禽痘病毒活疫苗研究进展 |
| 1 禽痘病毒疫苗株及其分子生物学特点 |
| 2 高效表达的重组禽痘病毒转移载体 |
| 3 表达不同外源基因的重组禽痘病毒 |
| 4 重组禽痘病毒疫苗的免疫 |
| 5 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
（5）表达禽流感病毒HA、NA基因和传染性喉气管炎病毒gB基因重组鸡痘病毒的构建（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 引言 |
| 1.1 鸡痘病毒研究进展 |
| 1.1.1 鸡痘病毒 |
| 1.1.2 病毒的基因组 |
| 1.1.3 重组FPV 活载体疫苗的研究现状及发展趋势 |
| 1.2 禽流感病毒的研究进展 |
| 1.2.1 禽流感病毒分子生物学 |
| 1.2.2 鸡痘病毒载体在防治禽流感的研究进展 |
| 1.3 传染性喉气管炎及传染性喉气管炎病毒研究进展 |
| 1.3.1 传染性喉气管炎病毒分子生物学特征 |
| 1.3.2 传染性喉气管炎防控 |
| 1.4 目的和意义 |
| 第二章 表达 H9N2 亚型禽流感病毒 HA、NA 基因和传染性喉气管炎gB 基因重组鸡痘病毒的构建 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.2.1 材料 |
| 2.2.2 方法 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 AIV HA 基因的克隆及鉴定 |
| 2.3.2 转移载体的构建 |
| 2.3.3 转移载体的鉴定 |
| 2.3.4 重组病毒的获得和纯化 |
| 2.3.5 重组病毒AIV 的HA、NA 基因和ILTV 的gB 基因的鉴定 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 表达禽流感病毒 HA、NA 基因和传染性喉气管炎病毒gB 基因的重组鸡痘病毒的生物学特性分析 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.2.1 材料 |
| 3.2.2 方法 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 重组病毒AIV 的HA 蛋白、NA 蛋白表达的检测 |
| 3.3.2 重组病毒ILTV 蛋白、gB 蛋白表达的检测 |
| 3.3.3 重组病毒gB 蛋白表达的检测 |
| 3.3.4 重组病毒HA、NA 蛋白表达的检测 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 全文结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（6）表达鸡传染性喉气管炎病毒gD基因与鸡IL-2基因重组禽痘病毒的构建及其免疫效力研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 英文摘要 |
| 本文部分缩写字母中英文对照 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 鸡传染性喉气管炎及其病原的生物学研究进展 |
| 1.鸡传染性喉气管炎的历史 |
| 2.鸡传染性喉气管炎的流行病学和发病特征 |
| 3.ILTV的生物学特性 |
| 4.ILTV的分子生物学研究进展 |
| 5.鸡传染性喉气管炎的诊断 |
| 参考文献 |
| 第二章 鸡传染性喉气管炎疫苗的研究现状 |
| 1.弱毒疫苗 |
| 2.油乳剂灭活苗 |
| 3.亚单位疫苗 |
| 4.基因缺失疫苗 |
| 5.DNA疫苗 |
| 6.基因工程活载体疫苗 |
| 参考文献 |
| 第三章 禽痘病毒载体研究进展 |
| 1.禽痘病毒载体的研究背景 |
| 2.禽痘病毒基因组 |
| 3.禽痘病毒复制的非必需区 |
| 4.禽痘病毒的启动子 |
| 5.外源基因在禽痘病毒中的表达 |
| 6.重组禽痘病毒疫苗的安全性、应用前景 |
| 参考文献 |
| 第四章 IL-2研究进展 |
| 1.IL-2的研究状况 |
| 2.鸡IL-2的研究进展 |
| 参考文献 |
| 第二篇试验研究 |
| 第五章 ILTV河南长葛株分离鉴定及gB、gC和gD基因克隆与分析 |
| 1.材料与方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 4.参考文献 |
| 第六章 ILTV长葛株gB、gC和gD基因真核表达载体构建及其免疫效果研究 |
| 1.材料与方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 4.参考文献 |
| 第七章 ILTV gD基因的表达及间接ELISA检测方法的初步建立 |
| 1.材料与方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 4.参考文献 |
| 第八章 表达ILTV gD基因重组禽痘病毒的构建及免疫效力试验 |
| 1.材料和方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 4.参考文献 |
| 第九章 ILTV gD基因与鸡IL-2重组禽痘病毒的构建及免疫效力试验 |
| 1.材料和方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 4.参考文献 |
| 全文总结 |
| 论文创新点 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表的文章和获得的奖励 |
（7）猪瘟病毒E0-E2基因重组鸡痘病毒遗传稳定性和免疫剂量研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 文献综述 |
| 第一章 猪瘟及猪瘟疫苗研究进展 |
| 1.1 猪瘟的病原 |
| 1.2 猪瘟的感染与临床症状 |
| 1.3 猪瘟的诊断 |
| 1.3.1 临床诊断 |
| 1.3.2 实验室诊断 |
| 1.4 猪瘟的防控 |
| 1.5 猪瘟疫苗研究进展 |
| 1.5.1 猪瘟传统疫苗 |
| 1.5.2 猪瘟新型疫苗 |
| 1.5.3 展望 |
| 第二章 鸡痘病毒载体研究进展 |
| 2.1 FPV的主要特性 |
| 2.2 FPV的培养 |
| 2.3 FPV作为载体的特性 |
| 2.4 FPV病毒载体的应用 |
| 2.4.1 FPV载体在禽类中的的应用 |
| 2.4.2 FPV载体在哺乳动物中的应用 |
| 2.5 rFPV的遗传稳定性 |
| 试验研究 |
| 第三章 猪瘟病毒E0-E2基因重组鸡痘病毒的遗传稳定性 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 毒种 |
| 3.1.2 主要仪器 |
| 3.1.3 主要药品及试剂 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 重组病毒rFPV-E0-E2的传代 |
| 3.2.2 重组病毒rFPV-E0-E2的蓝斑纯度鉴定 |
| 3.2.3 引物的设计与合成 |
| 3.2.4 重组病毒DNA制备 |
| 3.2.5 E0、E2基因的PCR扩增 |
| 3.2.6 E0、E2基因的克隆与测序分析 |
| 3.2.7 基因表达产物的间接免疫荧光检测 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 重组病毒rFPV-E0-E2的蓝斑纯度检验 |
| 3.3.2 重组病毒中E0和E2基因的PCR扩增 |
| 3.3.3 E0、E2基因的克隆与测序分析 |
| 3.3.4 基因表达产物的间接免疫荧光检测 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 猪瘟病毒E0-E2基因重组鸡痘病毒种子批建立、疫苗毒制备及CSFV Shimen株LD_(50)测定 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 毒种 |
| 4.1.2 引物合成 |
| 4.1.3 主要仪器 |
| 4.1.4 主要药品及试剂 |
| 4.1.5 实验动物 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 重组病毒rFPV-E0-E2毒种的增殖 |
| 4.2.2 病毒含量测定 |
| 4.2.3 蓝斑鉴定 |
| 4.2.4 rFPV的PCR鉴定 |
| 4.2.5 CSFV E0-E2表达蛋白的免疫荧光检测 |
| 4.2.6 无菌检验 |
| 4.2.7 疫苗毒制备 |
| 4.2.8 疫苗毒检验 |
| 4.2.9 CSFV Shimen株半数致死量测定 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 重组病毒rFPV-E0-E2毒种的增殖与鉴定 |
| 4.3.2 疫苗毒制备与检验 |
| 4.3.3 CSFV Shimen株LD_(50)测定 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 猪瘟病毒E0-E2基因重组鸡痘病毒免疫剂量试验 |
| 5.1 材料 |
| 5.1.1 病毒 |
| 5.1.2 工具酶及试剂 |
| 5.1.3 试验用动物 |
| 5.2 方法 |
| 5.2.1 疫苗免疫与攻毒 |
| 5.2.2 血清ELISA抗体的检测 |
| 5.2.3 临床观察 |
| 5.2.4 血液中CSFV的检测 |
| 5.2.5 病理观察 |
| 5.2.6 疫苗抑制排毒的检测 |
| 5.2.7 半数保护剂量的确定 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 疫苗安全性 |
| 5.3.2 抗体检测 |
| 5.3.3 临床症状 |
| 5.3.4 病理变化 |
| 5.3.5 攻毒后血液中CSFV的检测 |
| 5.3.6 疫苗阻止排毒 |
| 5.3.7 半数保护剂量的确定 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（8）口蹄疫病毒基因重组鸡痘病毒活载体疫苗系统鉴定研究（论文提纲范文）
| 提要 |
| 前言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 重组病毒活载体疫苗的研究进展 |
| 1 反转录病毒载体 |
| 2 腺病毒载体 |
| 3 腺相关病毒载体 |
| 4 单纯疱疹病毒载体 |
| 5 辛德毕斯病毒载体 |
| 6 痘病毒 |
| 7 结语 |
| 第二章 口蹄疫病毒重组载体疫苗的研究进展 |
| 1 口蹄疫的危害 |
| 2 FMDV 的特点 |
| 3 载体的选择 |
| 4 FMDV 重组病毒活载体疫苗应用 |
| 5 结语 |
| 第三章 重组鸡痘病毒疫苗安全性研究进展 |
| 1 基因工程生物制品的安全性评价要求 |
| 2 鸡痘病毒 |
| 3 重组鸡痘病毒活载体疫苗安全评价的研究 |
| 4 结语 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第一章 重组鸡痘病毒遗传稳定性和理化学特性研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二章 重组鸡痘病毒毒种鉴定及生物学特性研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 重组鸡痘病毒在小鼠、豚鼠体内的毒性、分布及抗体消长规律研究 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第四章 重组鸡痘病毒在猪、牛体内的毒性、分布、抗体消长规律研究 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第五章 重组鸡痘疫苗对妊娠动物和子代动物毒性实验 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第六章 重组鸡痘病毒毒性试验和环境释放安全试验研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 博士期间发表论文 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 致谢 |
| 导师简介 |
| 作者简介 |
| CURRICULUM VITAE |
（10）利用Cre-loxP自动敲除AIV H5 HA重组鸡痘病毒中的报告基因（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 综述 禽痘病毒表达载体的研究进展 |
| 1 禽痘病毒的基本特性 |
| 2 重组禽痘病毒的构建 |
| 2.1 构建原理 |
| 2.2 基本元件 |
| 2.3 重组禽痘病毒的筛选 |
| 2.4 构建重组禽痘病毒时应注意的事项 |
| 3 外源基因在重组禽痘病毒中的表达 |
| 3.1 传染性法氏囊病毒 |
| 3.2 禽流感病毒 |
| 3.3 新城疫病毒 |
| 3.4 马立克氏病毒 |
| 3.5 传染性支气管炎病毒 |
| 3.6 传染性喉气管炎病毒 |
| 3.7 狂犬病病毒 |
| 3.8 网状内皮组织增生综合症病毒 |
| 3.9 细胞因子 |
| 3.10 其他 |
| 4 禽痘病毒表达载体的优越性 |
| 5 重组禽痘病毒疫苗的应用前景 |
| 实验一禽痘病毒通用转移载体的构建 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 重组臂基因的扩增克隆 |
| 2.2 重组病毒的构建 |
| 2.3 转移质粒载体pPCI 的 PCR 鉴定 |
| 2.4 转移质粒载体pHBP 的酶切鉴定 |
| 2.5 病毒的复制效率 |
| 3讨论 |
| 实验二表达禽流感病毒H5 血凝素重组禽痘病毒的构建 |
| 1. 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 AIV H5 血凝素基因表达盒的构建 |
| 2.2 重组病毒的构建 |
| 2.3 HA 基因插入rFPVH5 基因组的 PCR 鉴定 |
| 3 讨论 |
| 实验三表达H5 亚型HA 基因的重组鸡痘病毒的免疫效力测定 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 重组毒与亲本毒的扩增后滴度测定 |
| 2.2 HI 检测 |
| 3 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 论文发表情况 |
四、“中国疫苗株鸡痘病毒载体和高效表达马立克氏病病毒gB基因的重组鸡痘病毒”课题通过专家鉴定（论文参考文献）
- [1]动物病毒重组活载体疫苗研究进展[J]. 谢青梅,封柯宇,沈勇. 华南农业大学学报, 2019(05)
- [2]共表达H5亚型禽流感病毒HA基因和鸡IL-6基因重组鸡痘病毒的生物安全评价[D]. 娄亚坤. 扬州大学, 2014(01)
- [3]表达NDV、IBDV及FMDV基因的重组FPV载体活疫苗构建和实验免疫研究[D]. 朱战波. 吉林大学, 2012(12)
- [4]表达鸡新城疫病毒HN基因重组鸡痘病毒活疫苗的临床前研究[D]. 甘军纪. 扬州大学, 2010(04)
- [5]表达禽流感病毒HA、NA基因和传染性喉气管炎病毒gB基因重组鸡痘病毒的构建[D]. 胡文玮. 中国农业科学院, 2008(10)
- [6]表达鸡传染性喉气管炎病毒gD基因与鸡IL-2基因重组禽痘病毒的构建及其免疫效力研究[D]. 杨明凡. 南京农业大学, 2008(08)
- [7]猪瘟病毒E0-E2基因重组鸡痘病毒遗传稳定性和免疫剂量研究[D]. 张浩. 西北农林科技大学, 2008(12)
- [8]口蹄疫病毒基因重组鸡痘病毒活载体疫苗系统鉴定研究[D]. 金明兰. 吉林大学, 2007(03)
- [9]表达鸡马立克氏病病毒gB基因重组鸡痘病毒的遗传稳定性及生物安全性评价[J]. 卢军,胡传伟,金乔,彭大新,刘文博,高崧,张如宽,刘秀梵. 中国预防兽医学报, 2007(05)
- [10]利用Cre-loxP自动敲除AIV H5 HA重组鸡痘病毒中的报告基因[D]. 高月花. 山东农业大学, 2006(12)